[发明专利]转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法

权利要求书

1.一种转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，合成具有以下核苷酸序列的引物及与引物配合使用的荧光探针，

上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，

下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，

荧光探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所示荧光探针的5’端标记有荧光基团，3’端标记有淬灭基团；

步骤2，从转植酸酶基因玉米BVLA430101中提取出DNA并制备其稀释液；

步骤3，配制PCR反应体系，包括以下组分：所述正向引物、所述反向引物、所述荧光探针、10×Buffer、dNTPs、MgCl₂、Taq DNA聚合酶、ddH₂O；

步骤4，将所述DNA稀释液加入到所述PCR反应体系中，采用定量PCR仪对所述DNA稀释液进行PCR扩增反应并检测。

2.如权利要求1所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，步骤1中，所述荧光基团为FAM，所述淬灭基团为BHQ1。

3.如权利要求1所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，步骤1中，所述上游引物、下游引物和荧光探针的浓度均为10μmol/L。

4.如权利要求3所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，步骤2中，所述DNA稀释液的浓度为20ng/μL。

5.如权利要求4所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，步骤3中，所述PCR反应体系包括以下组分：

6.如权利要求5所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，步骤4中，将5μL所述DNA稀释液加入到所述反应体系中，采用定量PCR仪对所述DNA稀释液进行PCR扩增反应并检测。

7.如权利要求1所述的转植酸酶基因玉米BVLA430101品系特异性定量PCR检测方法，其特征在于，所述PCR扩增反应的条件为：95℃预变性5min，1个循环；95℃变性15s，60℃退火60s，45个循环。