[发明专利]一种从细胞培养上清中分离纯化抗体的方法有效
| 申请号： | 201310433861.4 | 申请日： | 2013-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN103497248A | 公开（公告）日： | 2014-01-08 |
| 发明（设计）人： | 游明翰;徐国林 | 申请（专利权）人： | 中国抗体制药有限公司 |
| 主分类号： | C07K16/00 | 分类号： | C07K16/00;C07K1/22;C07K1/18 |
| 代理公司： | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人： | 关畅 |
| 地址： | 中国香港新界沙田香港科学*** | 国省代码： | 中国香港;81 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 细胞培养 上清中 分离 纯化 抗体 方法 | ||
1.一种从细胞培养上清中分离纯化抗体的方法，依次包括如下步骤：
（1）取可以分泌抗体的细胞的细胞培养上清；
（2）进行亲和层析；
（3）进行阳离子交换层析；
（4）进行阴离子交换层析；
其特征在于：每个层析步骤后不进行缓冲液的置换，直接进行下一个层析步骤。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤（1）和所述步骤（2）之间还包括过滤收集滤液的步骤。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述亲和层析中，采用蛋白A亲和层析基质，用pH3.1-3.3的醋酸盐缓冲液洗脱以收集目标抗体。
4.如权利要求1至3中任一所述的方法，其特征在于：所述步骤（2）和所述步骤（3）之间，还包括对亲和层析收集的过柱后溶液调pH的步骤。
5.如权利要求1至4中任一所述的方法，其特征在于：所述阳离子交换层析中，采用SP-Sepharose Fast Flow基质，用30-50mM、pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液洗脱以收集目标抗体。
6.如权利要求1至5中任一所述的方法，其特征在于：所述阴离子交换层析中，采用Q-Sepharose Fast Flow基质，用30-50mM、pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液洗脱冲顶以收集目标抗体。
7.一种从细胞培养上清中分离纯化抗体的方法，依次包括如下步骤：
①取可以分泌抗体的细胞的细胞培养上清；
②进行亲和层析；
③进行链合离子交换层析；所述链合离子交换层析由阳离子交换层析和阴离子交换层析组成，阳离子交换层析的出样口与阴离子交换层析的上样口连通。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于：所述阳离子交换层析中采用SP-Sepharose Fast Flow基质，所述阴离子交换层析中采用Q-Sepharose Fast Flow基质，所述链合离子交换层析用30-50mM、pH7.4-7.6的磷酸盐缓冲液洗脱冲顶以收集目标抗体。
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