[发明专利]一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法

权利要求书

1.一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，其特征在于按下述步骤完成：

（1）乳酸菌的活化和酵母菌的活化：将冻干保存的屎肠球菌Enterococcus faecium HE5菌株接种至MRS液体培养基中，在其最适增殖温度37℃下培养18h，连续增殖三代，备用；将冻干保存的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeJ-4接种于YEPD液体培养基中，30℃、130r/min摇床培养至36h，连续增殖三代，备用；其中屎肠球菌Enterococcus faeciumHE5菌株的保藏编号为CGMCC No.7766,酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeJ-4的保藏编号为CGMCC No.7765，均于2013年06月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址100101北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；

（2）乳酸菌和酵母菌混合发酵：将活化三代的屎肠球菌HE5与酿酒酵母J-4接入优化的脱脂乳培养基，先经过30℃、130r/min摇床培养至12h，后进入37℃恒温静止培养至36h；

（3）将上述发酵液经6000r/min离心15min，弃上清，用等量的灭菌生理盐水清洗离心菌体2～3次，收集菌体；

（4）添加冷冻保护剂：将收集的菌体，按照菌体:保护剂=1:10（g/ml）比例将保护剂加入制得的菌体中，振荡混匀；

（5）冷冻干燥：将加入保护剂的发酵液放入-80℃冰箱中预冻12h，再将其迅速放入真空冷冻干燥机中，在-53℃，68×10^-3Mb的条件下干燥18h左右，即可收获成品；

（6）包装：铝箔袋真空包装。

2.按照权利要求1所述的乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，其特征在于：所述步骤（2）中发酵菌株屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4的接种体积配比为1:1，优化的脱脂乳培养基为脱脂乳粉10g/100mL、大豆蛋白胨1g/100mL、蔗糖0.5g/100mL、酵母浸粉0.5g/100mL。

3.按照权利要求1所述的乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，其特征在于：所述步骤（4）中发酵产物需添加冷冻保护剂：脱脂乳浓度10%、蔗糖浓度10%、谷氨酸钠5%、甘油3%，按照菌体:保护剂=1:10（g/ml）比例将保护剂加入制得的菌体中，振荡混匀，再冷冻干燥。

4.权利要求1-5任一项的生产方法所获得的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂包含冷冻干燥的屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4。

5.权利要求4所述的微生物制剂用于制备发酵食品或发酵饲料的用途。

6.权利要求5所述的微生物制剂的用途，其特征在于所述微生物制剂被用作发酵剂。

7.一种用于制备权利要求1所述的微生物制剂的屎肠球菌Enterococcus faecium HE5菌株，其特征在于该菌株的保藏编号为CGMCC NO.7766，于2013年06月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址100101北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。

8.一种用于制备权利要求1所述的微生物制剂的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae J-4，其特征在于该菌株的保藏编号为CGMCC NO.7765，于2013年06月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址100101北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所。