[发明专利]一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法

说明书

技术领域

本发明属于食品生物技术领域，具体涉及的是一种全新的乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，以及通过所述方法所获得的微生物制剂。

背景技术

微生物制剂在食品加工、营养保健等领域具有广泛的应用，如酸奶发酵剂；面包、馒头发酵剂；家畜饲料发酵剂等。但作为乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂还很少，特别是来自内蒙古民族乳制品酸马奶酒中的微生物菌种就更少见报道。酸马奶酒是一种以马奶为原料，乳酸菌和酵母菌共同自然发酵而形成的一种饮品，其以具有营养、保健、医疗功能和风味独特而著称，在蒙医药领域一直是治疗结核病、心血管疾病、高血压、免疫力低下等疾病的辅助药品。至今在东欧、蒙古国以及我国的内蒙古、新疆地区兴盛不衰。其医疗保健作用一直吸引着国内外学者的研究兴趣，尤其是日本、美国、新加坡以及国内的学者对发酵酸马奶的微生物种群投入了大量的研究，取得了可喜的成果，但至今还没有将酸马奶的微生物种群应用到产品开发方面。因此，本发明是具有广泛的应用前景。

发明内容

本发明的目的是提供一种乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，以及通过所述方法所获得的微生物制剂。本发明的乳酸菌和酵母菌共生发酵的微生物制剂的生产方法，是按下述步骤完成的：

（1）乳酸菌的活化和酵母菌的活化：将冻干保存的屎肠球菌Enterococcus faecium HE5菌株接种至MRS液体培养基中，在其最适增殖温度37℃下培养18h，连续增殖三代，备用；将冻干保存的酿酒酵母Saccharomyces cerevisiaeJ-4接种于YEPD液体培养基中，30℃、130r/min摇床培养至36h，连续增殖三代，备用；

（2）乳酸菌和酵母菌混合发酵：将活化三代的屎肠球菌HE5与酿酒酵母J-4接入优化的脱脂乳培养基，先经过30℃、130r/min摇床培养至12h，后进入37℃恒温静止培养至36h；

（3）将上述发酵液经6000r/min离心15min，弃上清，用等量的灭菌生理盐水清洗离心菌体2～3次，收集菌体。

（4）将收集的菌体，按照菌体：保护剂=1:10（g/ml）比例将保护剂加入制得的菌体中，振荡混匀，分装入冻存盘，然后将其放在-80℃冰箱中预冻12h，再将其迅速放入真空冷冻干燥机中，在-53℃，68×10^-3Mb的条件下干燥18h左右，即可收获成品。

（5）包装：铝箔袋真空包装，

其中所述步骤（2）中发酵菌株屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4的接种体积配比为1:1，优化的脱脂乳培养基为脱脂乳粉10g/100mL、大豆蛋白胨1g/100mL、蔗糖0.5g/100mL、酵母浸粉0.5g/100mL，所述步骤（3）中发酵产物需添加冷冻保护剂：脱脂乳浓度10%、蔗糖浓度10%、谷氨酸钠5%、甘油3%，再冷冻干燥。

本发明另一方面还涉及上述生产方法所获得的微生物制剂，所述微生物制剂包含冷冻干燥的屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4。本发明中所用的屎肠球菌和毕赤氏酵母菌已经保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其中屎肠球菌菌株的保藏编号为CGMCC NO.7766,酿酒酵母J-4的保藏编号为CGMCC NO.7765。

另一方面，本发明还涉及所述的微生物制剂的用途，本发明的这种微生物制剂可以进一步应用到食品发酵、饲料发酵生产中。

本发明的具体实施包括以下工序：

（1）共生作用好的乳酸菌和酵母菌筛选：在各自培养发酵过程中，加入对方的发酵培养液，均能促进生长和增强产酸能力。选出了一组共生作用好的屎肠球菌HE5和酿酒酵母J-4。

（2）乳酸菌的活化和酵母菌的活化：将冻干保存的屎肠球菌HE5菌株接种至MRS液体培养基中，在其最适增殖温度37℃下培养18h，连续增殖三代，备用；将冻干酿酒酵母J-4接种于YEPD液体培养基中，30℃、130r/min摇床培养至36h，连续增殖三代，备用。

（3）：乳酸菌和酵母菌混合发酵：将活化三代的乳酸菌与酵母菌按照1:1接种比例、总接种量为4%接入优化脱脂乳培养基。优化脱脂乳培养基为：脱脂乳粉10g/100mL、大豆蛋白胨1g/100mL、蔗糖0.5g/100mL、酵母浸粉0.5g/100mL。先经过30℃、130r/min摇床培养至12h后进入37℃恒温静止培养至36h。

（4）将上述发酵液经6000r/min离心15min，弃上清，用等量的灭菌生理盐水清洗离心菌体2～3次，收集菌体。