[发明专利]高油酸花生分子标记及其辅助选择回交育种方法和应用

权利要求书

1.一种高油酸花生分子标记，其特征在于，所述分子标记在花生ahFAD2B位点的变异特异引物序列分别为：

正向引物MITE-INS-F：GGATGATGGATTGTATGG，

反向引物MITE-INS-R：CTCTGACTATGCATCAG；

在花生ahFAD2B位点无变异特异引物序列分别为： 

正向引物WILD-F为：CAGAACCATTAGCTTTG，

反向引物WILD-R为：CTGAGACATAAATTAGAAGCC。

2.利用权利要求1所述的分子标记进行高油酸花生的回交育种方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

（1）将基因型AABB的普通油酸含量的花生亲本，与基因型aabb的高油酸含量的花生亲本杂交，得到后代F₁；

（2）以后代F₁做父本，与基因型AABB的花生亲本回交，得到后代BC₁F₁；

（3）提取后代BC₁F₁单株的DNA，利用花生基因组中的一对引物扩增FAD2A基因片段，其中正向引物aF19为：GATTACTGATTATTGACTT，反向引物R3为：CCCTGGTGGATTGTTCA，

扩增后测序，选择含Aa基因型的单株；

然后利用所述花生ahFAD2B位点的变异特异引物和无变异特异引物作为标记分别对含Aa基因型的单株进行PCR检测，选择Bb基因型的单株；将两个标记均显性即含AaBb基因型的BC₁F₁单株继续与亲本AABB回交，得到后代BC₂F₁；

（4）提取后代BC₂F₁单株的DNA，按照步骤（3）的方法进行引物扩增和PCR检测，将两个标记均显性即AaBb基因型的BC₂F₁单株继续与优良亲本AABB回交，得到后代BC₃F₁；

（5）提取后代BC₃F₁单株的DNA，将两个标记均显性即含AaBb基因型的BC₃F₁植株进行自交，按照步骤（3）的方法进行引物扩增和PCR检测，从后代中选择基因型为aabb的高油酸含量的单株，即得到所述的高油酸花生品种。

3.如权利要求2所述的回交育种方法，其特征在于：所述普通油酸含量花生亲本的油酸含量<55%，高油酸含量的花生亲本油酸含量>70%。

4.如权利要求2所述的回交育种方法，其特征在于：其中利用FAD2A引物的扩增步骤为：

（1）PCR反应体系：PCR反应体系总体积为50 μL，包括10×buffer 5 μL、2 mmol L^–1 dNTPs 5 μL、25 mmol L^–1 MgSO₄ 3 μL、10 μmol L^–1的正向引物和反向引物引物各1.5 μL、模板DNA 200 ng、La Taq酶1 U；

（2） PCR反应条件：94℃预变性5 min；94℃变性30 s，50.9℃退火30 s，72℃延伸45 s，30次循环；最后72℃延伸10 min。