[发明专利]高油酸花生分子标记及其辅助选择回交育种方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于农业生物工程领域，具体涉及一种高油酸分子标记和利用该标记进行辅助选择的回交育种方法及其应用。

背景技术

栽培花生（Arachis hypogaea），又名落花生，蝶形花科，属一年生草本植物。花生原产南美，其种植地区主要分布在亚洲、非洲和美洲，其中亚洲约占60%，非洲约占30%， 美洲约占5.5%。我国是世界第一花生生产、消费和出口大国，花生在各省、市、自治区均有种植。花生作为重要的油料作物,其籽粒脂肪酸组成对花生的营养品质和贮藏品质均有很大影响。花生油中的油酸和亚油酸占总脂肪酸的80%左右。油酸是一种单不饱和脂肪酸,能降低身体低密度脂蛋白（LDL)水平,维持高密度脂蛋白（HDL)的水平；油酸比亚油酸等多不饱和脂肪酸的稳定性高,高油酸的食用油更耐贮藏,而且高温烹调不易氧化变质。因此,高油酸花生不仅有益于人们的身体健康,也可有效延长花生制品的保质期和货架期。

选育高油酸花生新品种是花生育种的重要目标之一。目前我国大面积推广的花生品种油酸含量不高,大多数花生种质资源的籽仁油酸含量在37%-55%之间，70%以上高油酸含量的花生资源几乎没有。

自从美国Norden（1987）筛选出油酸含量高达80%的高油酸花生自然突变体F435后，围绕花生油酸、亚油酸含量的分子基础及遗传规律研究取得了较大进展。已知FAD2 ( △¹²脂肪酸脱氢酶)是脂肪酸生物合成途径中催化油酸在第12碳位脱氢，形成双键向亚油酸转变的关键酶。花生基因组中存在两个ahFAD2等位基因，即ahFAD2A和 ahFAD2B，分别来自A和B基因组。高油酸是ahFAD2A基因在448 bp处发生G-A碱基替换，同时ahFAD2B基因突变的结果。高油酸花生自然突变体F435是ahFAD2B在442bp处发生一个A插入；高油酸花生诱发突变体M2-225和C458分别是在ahFAD2B基因起始密码子后997 bp和665 bp处存在MITE插入，导致基因功能丧失(Patel et al, 2004)。

为利用高油酸突变体作为杂交亲本进行分子标记辅助选择育种（MAS），Barkley等(2010)开发了F435突变位点的实时定量 PCR方法进行高油酸基因分型；Chen等(2010)开发了F435突变位点特异的普通PCR方法；Chu等（2011）利用CAPS方法进行了分子标记辅助选择的高油酸花生品种选育，但这些方法均有相应的不足，具有荧光标记成本高、结果不稳定和方法繁琐、酶成本高等缺点。

发明内容

本发明要解决的技术问题：针对现有技术存在的缺陷，提供一种高油酸花生分子标记；该标记引物具有标记方法简单、成本低和结果稳定的优点；

还提供了利用该分子标记进行高油酸花生的回交育种方法，该育种方法可显著提高性状选择的准确性，降低育种成本，提高育种效率。

本发明的技术方案：

一种高油酸花生分子标记，在花生ahFAD2B位点的变异特异引物序列分别为：

正向引物MITE-INS-F：GGATGATGGATTGTATGG，

反向引物MITE-INS-R：CTCTGACTATGCATCAG；

在花生ahFAD2B位点无变异特异引物序列分别为： 

正向引物WILD-F为：CAGAACCATTAGCTTTG，

反向引物WILD-R为：CTGAGACATAAATTAGAAGCC。

利用所述的分子标记进行高油酸花生的回交育种方法，包括以下步骤：

（1）将基因型AABB的普通油酸含量的花生亲本，与基因型aabb的高油酸含量的花生亲本杂交，得到后代F₁；

（2）选择后代F₁做父本，与基因型AABB的花生亲本回交，得到后代BC₁F₁；

（3）提取后代BC₁F₁单株的DNA，利用花生基因组中的一对引物扩增FAD2A基因片段，其中正向引物aF19为：GATTACTGATTATTGACTT，反向引物R3为：CCCTGGTGGATTGTTCA，

扩增后测序，选择含Aa基因型的单株；