[发明专利]一种水酶法-半仿生法提取茶叶籽中黄酮的方法

说明书

技术领域

本发明属于黄酮的提取领域，具体涉及一种水酶法集合半仿生法提取茶叶籽中黄酮的方法。

背景技术

我国是产茶大国，种植面积及产量均居于世界首位，茶树资源丰富，每年茶籽产量约8亿多公斤，但长期以来人们对于茶叶籽的开发利用不足，大部分茶叶籽都被白白浪费掉了，国内外对茶叶籽的研究主要集中在茶叶籽油的提取精炼和茶皂素的提取上，而对黄酮类物质的研究开发较少，开发茶叶籽黄酮，避免资源浪费有着十分重要的意义和广阔的前景。

水酶法提取黄酮是一种较为高效环保的方法，但是水酶法的提取率还不太理想，一定程度上造成黄酮资源浪费，而且由于茶籽中的两性大分子物质蛋白质等物质的存在，使富含油/水的水酶法提黄酮体系中不可避免的形成o/w型乳状液（emulsion），这不但给体系分离带来极大的挑战，而且严重限制了提取率。

由于茶叶籽黄酮的提取纯化工艺还不完善，因此寻找更为高效的提取方法提取茶叶籽黄酮具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供一种水酶法-半仿生法提取茶叶籽中黄酮的方法，将水酶法和半仿生技术相结合，显著提高了茶叶籽中黄酮的提取率。

本发明采用如下的技术方案：

一种水酶法-半仿生法提取茶叶籽中黄酮的方法，包括以下步骤：

（1）茶叶籽粉制备：茶叶籽干燥去壳，粉碎过筛,得到茶叶籽粉；

（2）水酶法提取：按照茶籽粉与反应液的料液重量/体积比为1：3-6，称取茶叶籽粉，在此茶叶籽粉中先加入部分水，加热3-8分钟以消灭茶叶籽粉自身酶活性，然后冷却至室温，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶叶籽粉混合液，搅拌均匀，在51-55℃、搅拌条件下酶解0.5-2.0h；

（3）半仿生法提取：在酶解后的茶叶籽粉混合液中加入乙醇和水，使料液重量/体积比为1:25、乙醇的体积百分比浓度为60%，调节pH值为1.5-2.0，在80℃水浴中回流提取25-40min，然后在3500-4500r/min下离心5-15min，将离心后的上清液取出备用；滤渣用体积百分比浓度为60%的乙醇清洗，再分别调节pH至7-7.5和8.0-8.5重复上述的回流提取、离心分离步骤；合并三次离心液，旋转蒸发、干燥即得目的产物。

优选地，所述步骤（2）中酶液为纤维素酶溶解于部分蒸馏水中制成，纤维素酶的用量为6-12mg/g茶叶籽粉；所述酶液配制时在0-5℃条件下快速进行。

进一步地，水酶法-半仿生法提取茶叶籽中黄酮的方法，包括以下步骤：

（1）茶叶籽粉制备：茶叶籽去壳，粉碎过筛，烘干至恒重,得到茶叶籽粉；

（2）水酶法提取：按照茶籽粉与反应液的料液重量/体积比为1：4，称取茶叶籽粉，先加入部分水，加热4分钟以消灭茶叶籽粉自身酶活性，然后冷却至室温，加入已配置好的酶液及剩余的水，得到茶叶籽粉混合液，搅拌均匀，在53℃、搅拌条件下酶解0.85h；所述酶液为纤维素酶溶解于部分蒸馏水中在0-5℃条件下快速制成，纤维素酶的用量为10mg/g茶叶籽粉；

（3）半仿生法提取：在酶解后的茶叶籽粉混合液加入乙醇和水，使料液重量/体积比为1:25、乙醇的体积百分比浓度为60%，调节pH值为2.0，在80℃水浴中回流提取30min，然后在4000r/min下离心10min，将离心后的上清液取出备用；滤渣用体积百分比浓度为60%的乙醇清洗，再分别调节pH至7.4和8.0重复上述的回流提取、离心分离步骤；合并三次离心液，旋转蒸发、干燥即得目的产物。

采用上述方案后，本发明达到的有益效果为：通过酶法耦合半仿生法技术相结合，茶叶籽粉的总黄酮得率远高于按照农业部行业标准测出的茶叶籽粉黄酮得率，说明采用该方法提取茶叶籽粉总黄酮具有明显优势。

以下通过下列实验来具体说明本发明的效果：

试验例1：提取方法筛选

在茶叶籽黄酮提取过程中，本发明人对提取工艺进行了设计和选择，以提取时间、茶叶籽黄酮含量为考察指标，充分考虑水剂法、水酶法、水酶法-半仿生法三种方法对提取时间及黄酮含量的影响，进行了一系列的选择试验。

样品A：按照农业行业标准NY/T1295-2007《荞麦及其制品中总黄酮含量的测定》中“7.1试样制备”及“7.2试料溶液的制备”的方法制备样品，即简单工艺为：茶叶籽去壳——粉碎——加入甲醇溶液在（65±2）℃下恒温振荡提取2小时——过滤——即得；