[发明专利]定点突变获得的谷氨酸脱羧酶突变体基因及其编码蛋白质和应用有效
| 申请号： | 201310438163.3 | 申请日： | 2013-09-24 |
| 公开（公告）号： | CN103484444A | 公开（公告）日： | 2014-01-01 |
| 发明（设计）人： | 史锋;谢一龙;李永富;王小元 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/88 | 分类号： | C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12P13/00 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 定点 突变 获得 谷氨酸 脱羧酶 突变体 基因 及其 编码 蛋白质 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于酶活性中心附近的酸性氨基酸谷氨酸突变为中性氨基酸。
2.权利要求1所述的谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：核苷酸序列如SEQ ID NO.1。
3.权利要求1或2所述的谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：第312位谷氨酸突变为丝氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2。
4.权利要求1所述的谷氨酸脱羧酶突变体其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.3。
5.权利要求1或4所述的谷氨酸脱羧酶突变体，其特征在于：第91位谷氨酸突变为谷氨酰胺，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4。
6.获得权利要求3或5所述谷氨酸脱羧酶突变体的方法，其特征在于：在中国专利CN201110020606.8中公布的gadB1基因序列基础上，对其编码的氨基酸进行取代，所述氨基酸取代点分别为第312位的谷氨酸和第91位的谷氨酸。
7.权利要求1，2，4任一所述突变体基因及其所编码的酶在生物合成GABA的应用。
8.一种生产权利要求3或5所述谷氨酸脱羧酶突变体的方法，其特征是将SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.3所示的核苷酸序列以pET28a或能表达该酶的质粒为表达载体，以大肠杆菌（Escherichia coli）BL21(DE3)或能表达该酶的菌株为表达宿主，实现突变体基因gadB1E312S和gadB1E91Q的高效表达。
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