[发明专利]一种脑蛋白水解物制备方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种脑蛋白水解物的制备方法。

背景技术

脑蛋白水解物类药物是近年应用最多生化药物之一。在国内外相关研究领域及市场上占有重要地位。脑蛋白水解物作为健康、新鲜动物大脑组织经多酶酶解提取的一种活性脑多肽类物质，含有多种人脑必须氨基酸及脑磷脂、卵磷脂、肽类神经生长因子等重要元素，能以多种方式作用于中枢神经，调节和改善神经元的代谢，促进突触的形成，诱导神经元的分化，并进一步保护神经细胞免受各种缺血和神经毒素的损害。它可以通过血脑屏障，促进脑内蛋白质的合成，影响呼吸链，具有抗缺氧的保护能力，改善脑内能量代谢，激活腺苷酸环化酶催化其他激素系统，提供神经递质、肽类激素及辅酶前体。目前，临床上主要采用脑蛋白水解物制成注射剂，用于治疗痴呆和脑功能障碍、脑发育不全、脑萎缩、神经衰弱、脑外伤综合症、中枢神经系统感染、脑膜炎、老年性痴呆、抑郁症、精神病或脑血管代谢失调等多种疾病，同时能有效增强学习记忆能力

CN200410022091.5公开了一种脑蛋白水解物的制备方法，该发明通过先后使用胃蛋白酶、胰蛋白酶进行酶解的方法制备脑蛋白水解物，该方法工序复杂，且要调节酸碱性，可能出现蛋白质变性等问题。

发明内容

基于上述原因，申请人在研究过程中，得到一种的方法：该方法采用木瓜蛋白酶水解、复合酶水解、调节pH值和纳滤相结合的步骤，特别是使用一定比例的复合酶，得到脑蛋白水解物，该脑蛋白水解物，具有肽和总氮含量高，活力数值高，药理活性更强的优点。

具体而言，本发明提供了：

一种脑蛋白水解物的制备方法，该方法包括以下步骤：

a)原料处理：将新鲜或冷冻保存的猪脑去除表面的包膜及血管，切成小块后用0.5～5％氢氧化钠溶液浸泡12～48小时，取出洗净，沥干水分，备用；

b)酶水解：在盛放猪脑的反应釜中加水，按5000-10000U/g底物的比例加入自植物提取的木瓜蛋白酶，搅拌，酶解4-6小时；

c)复合酶水解：将步骤b)所得产物中加入复合酶，搅拌，酶解5-10小时；

d)灭菌：将步骤c)所得产物调节pH为6-7后，升温至80-85℃，灭酶8-12min，冷却至室温后加入活性炭，搅拌2-5小时后过滤，得滤液；

e)浓缩：将步骤d)所得滤液用100～1000Da的纳滤膜进行超滤，收集截留液；

f)将收集的截留液进行喷雾干燥，得到所述脑蛋白水解物。

所述复合酶为来自解淀粉芽孢杆菌的细菌蛋白酶、来自地衣芽孢杆菌的细菌蛋白酶组成的混合物。

所述来自解淀粉芽孢杆菌的细菌蛋白酶的酶活力为40万U/克。

所述来自地衣芽孢杆菌的细菌蛋白酶的酶活力为10万U/克。

所述复合酶中自解淀粉芽孢杆菌的细菌蛋白酶、来自地衣芽孢杆菌的细菌蛋白酶重量比为(0.5～3)：(1～5)。

所述复合酶中自解淀粉芽孢杆菌的细菌蛋白酶、来自地衣芽孢杆菌的细菌蛋白酶重量比优选1：2。

上述所述的制备方法得到的脑蛋白水解物为原料制备成口服制剂或注射制剂。

本发明所述的来自解淀粉芽孢杆菌的细菌蛋白酶、来自地衣芽孢杆菌的细菌蛋白酶、木瓜蛋白酶均购自上海宝丰生化有限公司。

本发明与现有技术相比具有以下优点和积极效果：

1、采用木瓜蛋白酶和复合酶的两步酶解的工艺保证最大程度上实现原料的水解；

2、用活性炭脱臭，充分利用活性炭的吸附作用和助滤作用，提高了产品含量，同时缩短了工艺时间；

3、采用纳滤膜进行膜分离，有效去除了小分子杂质，同时还对料液进行了浓缩，大幅降低了喷雾干燥过程的能耗；

4、本发明所述制备方法简单，易于工业化生产；

5、由该方法制备脑蛋白粉末肽含量高，活力高。

具体实施方式

以下通过具体实施方式的描述对本发明作进一步说明，但这并非是对本发明的限制，本领域技术人员根据本发明的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本发明的基本思想，均在本发明的范围之内。

本发明下述试验是在多次创造性试验基础上，进行的结论性验证试验。

实验例1动物药效学试验

试验药物：市售复方脑蛋白水解物片(购自大连贝尔药业有限公司)、本发明实施例5制得的样品，以蒸馏水配成所需浓度的溶液，供口服给药

使用。

1)对小鼠低压缺氧状态的影响