[发明专利]蛇足石杉内生真菌及其在制备吡咯类护肝药中的应用

权利要求书

1.一种蛇足石杉内生真菌，是从蕨类植物蛇足石杉植株活体的茎部分离获得，其分类命名为(Peyronellaea glomerata)HS-ZJUT-XW12，该菌株已保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2012年10月28日，保藏编号为CCTCC M2012434，保藏单位地址为中国，武汉，武汉大学。 

2.根据权利要求1所述的蛇足石杉内生真菌，其特征在于，菌株的ITS碱基序列为： 

TTCCGTAGGTGAACCTGCGGAAGGATCATTACCTAGAGTTGTAGGCTTTGCCTGCTATCTCTTACCCATGTCTTTTGAGTACCTTACGTTTCCTCGGCGGGTCCGCCCGCCGATTGGACAATTTAAACCATTTGCAGTTGCAATCAGCGTCTGAAAAAACTTAATAGTTACAACTTTCAACAACGGATCTCTTGGTTCTGGCATCGATGAAGAACGCAGCGAAATGCGATAAGTAGTGTGAATTGCAGAATTCAGTGAATCATCGAATCTTTGAACGCACATTGCGCCCCTTGGTATTCCATGGGGCATGCCTGTTCGAGCGTCATTTGTACCTTCAAGCTCTGCTTGGTGTTGGGTGTTTGTCTCGCCTCTGCGTGTAGACTCGCCTCAAAACAATTGGCAGCCGGCGTATTGATTTCGGAGCGCAGTACATCTCGCGCTTTGCACTCATAACGACGACGTCCAAAAGTACATTTTTACACTCTTGACCTCGGATCAGGTAGGGATACCCGCTGAACTTAAGCATATCAATAAGCGGAGG。 

3.根据权利要求1所述的蛇足石杉内生真菌，其特征在于，菌株的固体培养为：在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基上，于28℃下培养，菌丝呈白色絮状，生长较缓慢、与培养基结合紧密；培养4～7天，菌落即铺满整皿，菌落呈土灰色、干燥、不透明、边缘不平整，背面呈浅黄色。 

4.根据权利要求3所述的蛇足石杉内生真菌，其特征在于，所述的马铃薯葡萄糖琼脂培养基，通过如下方法制得：取200g马铃薯去皮、切块后，加1L 水煮沸约30分钟，双层纱布过滤，取滤液加20g葡萄糖、18g琼脂溶解后，加水补足1L。 

5.一种用如权利要求1～4所述的蛇足石杉内生真菌制备吡咯类护肝化合物的方法，包括如下步骤： 

(1)挑取菌丝体接种于马铃薯葡萄糖琼脂培养基，28℃培养，使菌株活化； 

(2)将活化好的菌株悬液接种于马铃薯葡萄糖液体培养基，121℃灭菌、28℃发酵培养，得菌液； 

(3)抽滤菌液，分别收集菌丝体和发酵液；发酵液用萃取剂萃取，减压蒸馏、回收溶剂，得发酵液的提取物； 

(4)取发酵液的提取物，依次进行大孔树脂吸附柱层析、硅胶柱层析、反相硅胶柱层析、凝胶柱层析，最终纯化、洗脱，得终产物。 

6.根据权利要求5所述的用蛇足石杉内生真菌制备吡咯类护肝化合物的方法，其特征在于，步骤(2)中发酵培养的条件为：温度28℃、180转／分钟的转速下振荡培养6天后静置培养14天。 

7.根据权利要求6所述的用蛇足石杉内生真菌制备吡咯类护肝化合物的方法，其特征在于，步骤(3)中的萃取剂为乙酸乙酯。 

8.一种如权利要求1～4所述的蛇足石杉内生真菌在制备吡咯类护肝药中的应用