[发明专利]包含改良型人凝血因子FVII-Fc融合蛋白的药物组合物

说明书

技术领域

本发明涉及一种改良型人凝血因子FVII的Fc融合蛋白及其制备方法和用途，特别是治疗多种凝血相关疾病的用途。

背景技术

凝血是由多种血液组分(或因子)之间复杂的相互作用组成的逐渐导致纤维蛋白凝块形成的过程，通常参与被称为凝血“级联反应”的血液组分是原酶或酶原，即不具有酶活性的蛋白，在激活剂的作用下使其转变为活性酶。凝血因子FVII就是这些凝血因子中的一种。

FVII是一种维生素K依赖性的血浆糖蛋白，在肝脏中合成，并以分子量约为53KDa的单链蛋白酶原形式分泌到血液中(Broze等，J Biol Chem，1980，255：1242-1247)。FVII酶原在单一位点Arg152-Ile153处被蛋白酶水解，产生由一个二硫键连接的双链，从而转变为其活性形式FVIIa。单链凝血因子FVII可以通过凝血因子FXa、凝血因子FXIIa、凝血因子FIXa、凝血因子FVIIa或凝血酶在体外水解转化为双链凝血因子FVIIa。活化的FVIIa包含NH₂-末端衍生的轻链(～20KDa)和COOH-末端衍生的经由单一二硫键(Cys135至Cys262)连接的重链(～30KDa)。轻链含有细胞膜结合性Gla结构域和两个EGF结合结构域，而重链含有催化结构域。处于活化形式时，FVIIa作为丝氨酸蛋白酶，参与凝血级联反应的外源性途径(extrinsic pathway)。当血管的脉管内腔受损伤时，外源性凝血路径被启动，细胞膜糖蛋白组织因子(Tissue Factor，TF)被暴露，结合循环性的FVII和已存在的较小量活化FVIIa，这种结合促进FVII全部转化为FVIIa，随后在钙离子和磷脂的协同作用下，使FIX转化为FIXa，FX转化为FXa，继而进一步将凝血酶原转化为凝血酶。凝血酶在血液凝固和伤口愈合方面起关键作用，在血管损伤的最初阶段，其诱导血小板聚集并诱导纤维蛋白形成，之后刺激细胞生长从而促进受损血管的修复(Osterud等，Proc Natl Acad Sci USA，1977，74：5260-5264)。

编码人FVII(hFVII)的基因位于13号染色体的q34-qter9，9个外显子组成，长度为12.8Kb(O’Hara等，Proc Natl Acad Sci USA，1987，84：5158-5162)。hFVII包含四个结构域：氨基端γ-羧基谷氨酸(Gla)结构域，两个“类表皮生长因子(EGF)”结构域和羧基端丝氨酸蛋白酶域(催化结构域)。外显子Ia和Ib编码信号肽序列；外显子2编码Gla结构域；外显子3编码一段短的疏水区；外显子4和5编码类表皮生长因子结构域；外显子6至8编码丝氨酸蛋白酶催化结构域(Yoshitake等，Biochemistry，1985，24：3736-3750)。成熟FVII蛋白经历多种翻译后修饰，包括维生素K依赖性的羧基化，导致该分子NH2-末端产生10个γ羧基化的谷氨酸残基。其他翻译后修饰包括羟基化(Asp63)、N-型糖基化(Asn145和Asn322)以及O-型糖基化(Ser52和Ser60)。

血友病A和B是遗传性疾病，分别是凝血因子FVIII和凝血因子FIX的缺陷而造成的。蛋白替代疗法是血友病A和B的传统治疗方法，包括静脉内给予从人血浆中制备的或基因工程方法获得的重组FVIII或FIX。然而，在血友病A和B的治疗中，存在最严重的医学问题是针对替代凝血因子的同种抗体(alloantibody)的产生，这导致治疗效力降低或者使治疗无效。所有血友病A患者中产生针对凝血因子FVIII抗体高达30％，而针对血友病B产生凝血因子FIX抗体发生几率较小，但具有更严重的后果，因为它们对免疫耐受性诱导疗法较不敏感。在血友病治疗中使用FVIIa是基于FVIIa对于凝血酶活化的血小板表面的低亲和性结合，通过给予药物学剂量的外源性FVIIa，使损伤位处血小板表面上的凝血酶产生被增强，这与FVIII/FIX的存在无关，即绕开对于凝血因子VIIIa和凝血因子IXa的需求来达到止血。因此，FVIIa可用于存在有抑制物的血友病患者的出血性状况的治疗。FVIIa还被用于治疗先天性FVII缺陷的患者。另外，FVIIa越来越多地被用做适应症外使用(off-lable use)，如治疗与非血友病患者中先天性或获得性出血性疾病，外伤或手术相关的出血。