[发明专利]一种快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法

权利要求书

1.一种快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）茎枝的处理与预培养：取生长正常、整齐、无病虫害的甘薯主茎或侧枝，用无菌手术刀将甘薯主茎或侧枝修剪成带有3～4片展叶的茎枝，剪后用无菌水洗去剪口处流出的汁液；将已修剪清洗的茎枝放入灭菌广口瓶中进行预培养，灭菌广口瓶装有占其体积1/3的蒸馏水或无菌水，室温条件下培养2～3天；

（2）茎腐病病原菌菌悬液的制备：将甘薯茎腐病病原菌菌株H12接种于改良营养琼脂培养基中，于28 ℃划线培养40～48 h后，用无菌水配成浓度为1×10⁸ cfu/mL的茎腐病病原菌菌悬液；

（3）茎枝的接种培养：待茎枝长出须根后，将茎枝平置，在茎枝中间位置且两节之间，用移液器的枪头扎1个小洞且不穿透茎枝，然后将茎枝平置于铺有浸透无菌水的滤纸的密闭塑料盒内，并且将扎有小洞的一侧朝上，吸取15～25 μL步骤（2）制得的菌悬液，注入茎枝小洞内进行接种，以无菌水作为空白对照，接种后将塑料盒盖好密封，置于30 ℃的光照培养箱内，培养20～24 h；

（4）病害症状观察与等级鉴定：培养20～24 h后，观察病害情况，并对甘薯茎枝进行病害等级鉴定。

2.根据权利要求1所述的快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于：步骤（1）中所述茎枝是从甘薯叶节下切断，所述茎枝的长度为12～15 cm。

3.根据权利要求1所述的快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于：所述步骤（2）中吸取20 μL步骤（2）制得的菌悬液，注入茎枝小洞内进行接种。

4.根据权利要求1所述的快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于：所述步骤（2）中茎枝接种后置于30 ℃的光照培养箱内，培养24 h。

5.根据权利要求1所述的快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于：所述改良营养琼脂培养基的组成包括蛋白胨5 g/L，蔗糖10 g/L，牛肉膏3 g/L，酵母浸膏1g/L和琼脂15 g/L，所述改良营养琼脂培养基的pH值为7.0～7.2。

6.根据权利要求1所述的快速鉴定甘薯茎腐病抗性的方法，其特征在于：步骤（4）中将甘薯的发病程度分为1～5级，其中1—无症状，健康；2—小洞出现黑色腐烂，但腐烂小于1 cm；3—腐烂大于等于1 cm小于2 cm，且腐烂没有通过任何一个叶节；4—腐烂长度大于等于2 cm小于3 cm或者腐烂通过任何一个叶节；5—腐烂长度大于3 cm或腐烂通过2个叶节；以甘薯的发病程度作为病害评价标准鉴定甘薯品种的抗病性，发病程度=5为高度感病品种，3≤发病程度﹤5为感病品种；1≤发病程度﹤3为抗病品种。