[发明专利]特异性沙门氏菌H:z29诊断血清工程菌株的构建方法

说明书

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，涉及能够制备特异性沙门氏菌系列诊断血清的工程菌株，更具体说是一种能够制备特异性沙门氏菌H:z29诊断血清的工程菌株及构建方法。

背景技术

沙门氏菌(Salmonella)是一种无芽孢、无荚膜的革兰氏阴性杆菌。除雏鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌外，其余都有鞭毛，能运动。多数具有菌毛，能吸附于细胞表面。沙门氏菌是肠杆菌科中最重要的病原菌属，目前全世界已发现约 2500 种血清型，这些血清型均可引起食源性疾病。沙门氏菌是引起食物中毒的重要病原菌。在世界各国的各类细菌性食物中毒中，沙门氏菌引起的食物中毒常居榜首。

沙门氏菌分类中用到的抗原主要有两种：菌体抗原和鞭毛抗原，分别称为O、H抗原。根据这两种抗原不同可将沙门氏菌划分成许多不同的血清型。血清型的概念是Kauffmann定义的。血清型即“A group of related serofermentative phage type”。沙门氏菌的鞭毛蛋白是由fliC或fljB基因所编码的，约1.5 kb。沙门氏菌的H抗原分为第一相和第二相。一相由fliC编码，二相由fljB编码，这两个基因通过变位机制协同表达。第一相具有较高的特异性，又称特异相，用小写英文字母a,b,c…z表示；第二相特异性较低，又称非特异相，用阿拉伯数字1,2,3,4…表示。

沙门氏菌菌型繁多，已确认的沙门氏菌有2500个以上的血清型。繁杂的各类生化反应，使常规检验程序复杂繁琐、耗时费力，且费用增加。所以研制沙门氏菌诊断血清一直是生物制品领域的热门课题。传统制备诊断血清的方法已经非常成熟。但传统方法耗时长，工作量大。且获得的是多克隆血清，其特异性不高，常发生一些交叉反应。本发明则是利用现代分子生物学技术对传统的血清制备体系进行了一系列改造，能够快速制备出特异性很强的诊断血清。

发明内容

本发明的目的是构建能够制备特异性沙门氏菌H:z29诊断血清的工程菌株；

本发明的目的通过以下技术方案实现：

一种能够制备特异性沙门氏菌H:z29诊断血清的工程菌株，其特征在于：它是将含有编码鞭毛抗原z29基因的重组质粒pTrc99a-fliC(z29)，转入表面鞭毛抗原合成基因缺失的沙门氏菌中得到的能够有效表达鞭毛抗原z29的工程菌株。

更具体地说是将fliC基因用质粒pKD3上的氯霉素乙酰转移酶基因替换，将fljB基因用质粒pKD4上的卡那霉素抗性基因替换，通过抗生素初步筛选出缺失菌株，再经过PCR鉴定及测序鉴定，得到相应的缺失菌株G4831△fliC△fljB，然后再将构建的重组质粒pTrc99a-fliC(z29)转入其中，筛选得到能够有效表达鞭毛抗原z29的工程菌株。

本发明所述的能够制备特异性沙门氏菌H:z29诊断血清的工程菌株，其中所述一相鞭毛抗原合成基因缺失菌株G4831△fliC，缺失后基因大小为1100bp（氯霉素乙酰转移酶基因），其序列为SEQ ID NO：1。

本发明所述的能够制备特异性沙门氏菌H:z29诊断血清的工程菌株，其中所述二相鞭毛抗原合成基因缺失菌株G4831△fliC△fljB，缺失后基因大小仍为1500bp（卡那霉素抗性基因），其序列为SEQ ID NO：2。

本发明进一步公开了特异性沙门氏菌系列诊断血清工程菌株的构建方法，其特征在于按如下的步骤进行：

(1)表面鞭毛抗原合成基因缺失菌株(G4831△fliC△fljB)的构建；

(2)重组质粒pTrc99a-fliC(z29)的构建；

(3)含有重组质粒pTrc99a-fliC(z29)的克隆菌株的构建。