[发明专利]一种复合发酵酶解制备几丁聚糖的方法

说明书

技术领域

 本发明涉及几丁聚糖制备方法，属于制造领域。

背景技术

甲壳素是一种天然含氮多糖物质，广泛存在与无脊椎动物的外壳或角质层中，尤其是虾蟹类的外壳中。甲壳素很容易获得，可再生，是仅次于纤维素的天然均聚物，但是因分子内部有很强的氢键作用，溶解性低，应用范围受到限制。

甲壳素脱乙酰后生成壳聚糖。目前壳聚糖的制备多采用化学法和酶解法脱乙酰。化学法脱乙酰反应中，影响脱乙酰的因素很多，但是主要影响因素包括：碱液浓度、反应温度和时间。一般来说，提高反应温度和延长反应时间均可提高脱乙酰度，但是会导致甲壳素主链降解增加，从而影响产品的粘度和分子量。通入氮气可以在一定程度上减缓主链的降解。由于化学法使用的碱液浓度高，反应时间长，产品质量不稳定，环境污染严重。传统的化学法制备壳聚糖脱钙和脱蛋白后的产物被废弃，无法回收利用，造成浪费。

因此，寻找一种强酸和强碱用量少、无污染、脱钙和脱蛋白产物能够被回收利用的方法将具有极佳的市场前景，这也成为本领域技术人员急需解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的几丁聚糖制备方法，所述的方法能够较现有技术更节能环保。

本发明的另一目的是提供一种安全的几丁聚糖制备方法，所述的方法制得的几丁聚糖无强酸或强碱残留，产品更安全。

本发明的另一目的是提供一种中间产物可以回收利用的几丁聚糖制备方法，以获取更高的经济价值。

本发明的另一目的是提供一种具有市场竞争力的几丁聚糖，所述的产品不因工艺的改进而增加生产成本。

为达到上述目的，本发明采用下列技术方案实现：

干燥、超微粉碎、发酵、酶解脱钙和蛋白、过滤；脱乙酰、水洗干燥即得。

本发明采用制备方法对脱钙前的蟹壳或虾壳进行预处理，然后再进行酶解脱钙和脱蛋白。

为增强脱钙和脱蛋白效果，本发明优选的将蟹壳或虾壳粉碎至0.5～1.0mm颗粒，颗粒过小则增加生产成本，颗粒过大效果较差。发明人经过多次试验及经验，最终确定0.5～1.0mm颗粒范围达到脱钙和成本的最佳性价比。

发明人提供大量实验，意外发现多种乳酸菌按照一定的配比组合进行发酵后脱钙效果更好，而采用乳双歧杆菌（B .lactis）、保加利亚乳杆菌(L. bulgaricus)和瑞士乳杆菌(L. helviticus)三种乳酸菌进行发酵效果较好；采用此三种乳酸菌配比后发酵效果最好，当三种乳酸菌以重量比2:6:5进行组合时，游离钙含量较单一乳酸菌发酵后提高10%～20%。优选的，乳酸菌占蟹壳或虾壳原料重量比为0.02～0.06%。

本发明采用高温灭菌的方法达到杀菌消毒的目的，同时也去除酶解液中的乳酸菌。

本发明的酶解采用复合酶解方法，经过筛选后，最终发现用木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶进行酶解较其他蛋白酶具有更好的效果。当然，选用其他蛋白酶进行酶解也能够实现本发明的目的。本发明工艺中最佳酶解方案是将蟹壳或虾壳粉碎后的原料中加入4-8倍重量体积比的水制成料液，加入乳酸菌发酵36h，然后70～100℃，20min；发酵液加入菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶重量比1:2～5的复合蛋白酶，加柠檬酸调PH值至5.5～6.5，40～60℃搅拌1～2h；分离液体，残渣再次重复提取。

酶解壳料所用的复合蛋白酶占壳料重量比为0.05～0.2%为佳。

酶解除具有脱蛋白的效果外，还具有脱钙的作用。酶解可以将发酵后的产品中钙元素游离出来，达到脱钙效果。

酶解脱蛋白后，过滤，滤液回收干燥得有机钙。残渣中加入40-60%的氢氧化钠溶液，60-90℃，1.5-4h，水洗至中性，干燥即得几丁聚糖。

经过酶解脱钙和脱蛋白后，去除了原料中的钙离子、蛋白质其它有机物质。

本发明所述的几丁聚糖脱乙酰度高达96%以上。

本发明的产物与任何一种或一种以上药剂学上辅料如淀粉、糊精、乳糖、微晶纤维素、羟丙甲基纤维素、聚乙二醇、硬脂酸镁、微粉硅胶、木糖醇、乳糖醇、葡萄糖、甘氨酸、甘露醇、甘氨酸等混合制成的各种剂型，例如，可制成片剂、缓释片、滴丸、颗粒剂、胶囊剂、微粒剂。优选剂型为胶囊剂或颗粒剂。

本发明的酶解工艺与现有技术制相比，脱钙与脱蛋白在同一步骤中实现，大大提高生产效率，无须使用强酸，耗能低，无污染，更加环保。酶解后的游离钙溶液经回收后可以制备成有机钙制剂，这样所有的产物都能够被合理利用产生显著的经济价值。

具体实施方式

实施例1