[发明专利]去除邻硝基苯甲醛的酶制剂及应用

权利要求书

1.一种去除邻硝基苯甲醛的酶制剂，其特征在于：所述的酶制剂为水溶液或缓冲溶液，包含一种邻硝基苯甲醛降解酶，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，以及终浓度为0.1-0.3mM的CaCl₂，反应体系pH值为6.5-8.0。

2.根据权利要求1所述的酶制剂，其特征在于：所述的邻硝基苯甲醛降解酶的纯酶含量为0.03-0.1mg/mL。

3.权利要求1所述的酶制剂，其特征在于：所述的CaCl₂终浓度为0.2mM。

4.一种去除邻硝基苯甲醛的酶制剂的制备方法，其特征在于：取纯化酶液样本20mL和氯化钙，用pH值7.5的80mM磷酸钠缓冲液定容至1L制成酶制剂，酶制剂中氯化钙的终浓度为0.1-0.3mM。

5.根据权利要求1所述的酶制剂的制备方法，其特征在于：所述纯化酶液样本的制备方法如下：挑取含有重组质粒的菌株，该重组质粒上含有nbaA基因编码片段，用LB培养基于37℃培养，待A_600nm值为0.6时，加入IPTG至终浓度1mm，随后于20℃过夜表达；离心收集细胞，重悬于80mM pH7.5的磷酸钠缓冲液，在冰水浴中超声破碎细胞——功率为400W超声波破碎5s，暂停15s，共进行60个循环；随后，于4℃，10000g离心30min去除细胞碎片，上清液即为粗酶提取液；使用一站式组氨酸标签蛋白纯化试剂盒对所述粗酶提取液进行纯化，获得纯化酶液样本。

6.一种权利要求1所述的酶制剂在降解土壤中邻硝基苯甲醛中的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于：应用权利要求1所述酶制剂降解土壤中邻硝基苯甲醛时，体系温度为18-40℃，pH为6.0-8.5。