[发明专利]一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC-3抗癌肽的方法及其抗癌肽

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗癌肽及其分离方法，具体涉及一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC-3抗癌肽的方法及其抗癌肽。

背景技术

癌症是目前影响人类健康最为重要一种疾病，但是大多数抗癌药物在杀死或抑制癌细胞同时对人体健康免疫系统或多或少存在一定毒副作用，所以开发高效、低毒、副作用小的抗癌药物是目前热点研究领域之一。蛋白质经适度酶解后可以释放出活性肽，近几年研究发现一些食物源蛋白质的水解液具有良好的抗癌效果，并且从中分离得到一些抗癌肽，如：从凤尾鱼露分离得到分子量为440.9Da疏水型抗癌肽（Lee,Lee,Kim,Kim,&Lee,2004，BioFactors,21(1-4),63–67.），从金枪鱼暗肉副产物的木瓜蛋白酶和蛋白酶XXIII水解液中分离纯化得到两个抗癌肽Leu-Pro-His-Val-Leu-Thr-Pro-Glu-Ala-Thr和-Ala-Glu-Gly-Gly-Val-Tyr-Met-Val-Thr（Hsu,Li-Chan,&Jao,2011，Food Chemistry，126(2),617–622.），从墨鱼墨汁的胰蛋白酶水解液中得到Gln-Pro-Lys抗癌三肽（Ding,Huang,Yang,Yu,&Yang,2011,Chinese Journal of Natural Medicines，9(2),151–155.），从厚壳贻贝的胃蛋白酶水解液中分离得到抗癌肽Ala-Phe-Asn-Ile-His-Asn-Arg-Asn-Leu-Leu（Kim et al.,2012,Journal of Microbiology and Biotechnology,22,1381–1387.），从菲律宾蛤仔的α-糜蛋白酶水解液中分离得到抗癌肽Ala-Val-Leu-Val-Asp-Lys-Gln-Cys-Pro-Asp（Kim et al.,2013，Process Biochemistry,http://dx.doi.org/10.1016/j.procbio.2013.05.004.）。但是以蛋白质水解液为底物，通过美拉德反应制备抗癌型热反应物，并从中分离抗癌肽的研究还少见报道。

黄鲫是我国东南沿海捕获量较大的一种低值小型海水鱼，在前期研究中我们报道了黄鲫蛋白抗菌肽的制备方法，可参考专利号ZL200910154494.8的中国发明专利《一种黄鲫蛋白抗菌肽的制备方法》(授权公告号为CN102051398B)。但是，黄鲫蛋白抗菌肽液的鱼腥味较重，会限制其作为功能型食品添加剂的应用范围。前期研究中已证实黄鲫蛋白抗菌肽的抗菌性热稳定性较高(宋茹,韦荣编,谢超,汪东风.黄鲫（Setipinna taty）蛋白酶解液的抑菌活性及稳定性研究[J].食品科学,2010,31(13):88-92.)，并报道了黄鲫蛋白抗菌肽液与不同类型外源糖进行美拉德热反应后的抑菌活性和风味特性（吴冬梅,宋茹.非酶热反应对黄鲫蛋白抗菌肽的抗菌性和风味特性影响.肉类研究，2011,25(2)：1-4；李婷,江晓婉,叶青,于妍,宋茹.采用美拉德反应提高黄鲫蛋白抗菌肽的抑菌活性.肉类研究,2012,1:14-17；李婷,江晓婉,于妍,叶青,宋茹.黄鲫蛋白抗菌肽——葡萄糖美拉德反应物的抑菌性实验研究.粮油食品科技，2012,20(3):42-45.）。但在研究中我们还发现未添加任何外源还原糖的黄鲫蛋白抗菌肽液，经美拉德反应得到的热反应产物对前列腺癌PC-3肿瘤细胞具有很强的增殖抑制作用，并且产物的风味性也得到了一定程度地改善。所以，本专利以黄鲫蛋白抗菌肽液为底物，通过不添加任何外源糖的美拉德反应制备抑制前列腺癌PC-3肿瘤细胞增殖的热反应物，并分离纯化其中的抗癌肽，为黄鲫蛋白抗菌肽液热反应产物在抗癌方面的应用奠定基础。

发明内容

本发明所要解决的一个技术问题是提供一种利用黄鲫蛋白抗菌肽液热反应物分离前列腺癌PC-3抗癌肽的方法，具有制备工艺简单、易操作等特点。

本发明所要解决的另一个技术问题是提供一种前列腺癌PC-3抗癌肽，其能通过诱导细胞凋亡和阻滞细胞分裂于S期的方式来实现抑制癌细胞增殖作用。

1)制备黄鲫蛋白抗菌肽液，调节黄鲫蛋白抗菌肽液的pH值至5.0～7.0；

2)对黄鲫蛋白抗菌肽液热处理，在100～121℃杀菌锅中加热30～60min，以制得黄鲫蛋白抗菌肽液的热反应产物；