[发明专利]睡莲花的鉴别和含量测定方法

权利要求书

1.一种睡莲花的鉴别和含量测定方法，睡莲花中没食子酸和烟花苷的薄层鉴别方法和含量测定方法，具体步骤如下：

步骤一、采用薄层色谱法对睡莲花中的没食子酸和烟花苷进行定性分析

在硅胶GF254薄层板上，分别点没食子酸-甲醇溶液、睡莲花药材-甲醇溶液，在聚酰胺薄膜上，点烟花苷-甲醇溶液、睡莲花药材-甲醇溶液，以乙酸乙酯-甲酸-水按体积比为8:1:1为展开剂展开，取出，晾干，置于荧光灯下检视；

步骤二、采用高效液相色谱法对睡莲花中没食子酸和烟花苷进行含量测定

   1）对照品的制备

a、精密称取对照品没食子酸和烟花苷，加甲醇制成没食子酸和烟花苷的对照品储备液，浓度分别为0.650mg/ml、0.531mg/ml；

b、分别吸取没食子酸和烟花苷对照品储备液各1ml、2.5ml，加甲醇稀释，得到含烟花苷和没食子酸的对照品混合溶液，所含烟花苷的浓度为0.1328mg/ml、所含没食子酸的浓度为0.0650mg/ml；

2）供试品的制备

    精密称取1g睡莲花药材粉末，置于50ml具塞锥形瓶中，加入50ml甲醇，称重，超声提取30min，放冷后，称量质量并用甲醇补足质量差，过滤，置于样品瓶中，作为供试品溶液；

    3）含量测定

   测定睡莲花中没食子酸和烟花苷的含量时，采用没食子酸及烟花苷标准品做对照品，绘制进样量—色谱峰面积的标准曲线，测定睡莲花的色谱峰面积，从标准曲线上读出睡莲花中没食子酸及烟花苷的含量，其中，液相色谱测定峰面积的色谱条件为：色谱柱的直径和长度为4.6mm×250mm，5μm的Wondasil^TM C18，检测波长为270nm，流动相为甲醇和0.1%冰乙酸混合水溶液，柱温为30℃，流速为1mL/min，进样量为5μl，采样时间为50min，采用梯度洗脱。

2.根据权利要求1所述的睡莲花的鉴别和含量测定方法，其特征在于：所述步骤二的步骤2中，所述过滤采用0.45μm微孔膜过滤。

3.根据权利要求1所述的睡莲花的鉴别和含量测定方法，其特征在于：所述步骤二的步骤3）中，所述梯度洗脱具体为：流动相中0.1%冰乙酸的体积百分数随时间变化为0.01～10min，从90%线性降至75%；10～25min，从75%线性降至55%；25～35min，从55%线性降至45%；35～50min，从45%线性降至0%。