[发明专利]一种基因工程改造的免疫球蛋白-亲和蛋白

权利要求书

1.一种用于基因工程改造的免疫球蛋白-亲和蛋白的引物组，其特征在于，包括，

正向引物C-N6T-F，其为SEQ ID No.1所示的多核苷酸序列；

反向引物C-N6T-R，其为SEQ ID No.2所示的多核苷酸序列；

正向引物C-N28T-F，其为SEQ ID No.3所示的多核苷酸序列；

反向引物C-N28T-R，其为SEQ ID No.4所示的多核苷酸序列。

2.如权利要求1所述的用于基因工程改造的免疫球蛋白-亲和蛋白的引物组，其特征在于，所述引物组中C-N6T-F和C-N6T-R用于金黄色葡萄球菌的蛋白A的C结构域中第6个天门冬酰胺突变成苏氨酸的改造，突变位点简写为N6T，所述引物组中C-N28T-F和C-N28T-R用于金黄色葡萄球菌的蛋白A的C结构域中第28个天门冬酰胺突变成苏氨酸的改造，突变位点简写为N28T。

3.一种基因工程改造的免疫球蛋白-亲和蛋白，其特征在于，所述免疫球蛋白-亲和蛋白为使用权利要求1所述引物组通过基因工程改造方法获得的免疫球蛋白-亲和蛋白，所述改造后的免疫球蛋白-亲和蛋白可用于抗体药物纯化。

4.一种用于基因工程改造免疫球蛋白-亲和蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)根据金黄色葡萄球菌的蛋白A的C结构域的基因序列通过全序列基因合成出一段DNA，备用；

2)将所述DNA作为模板，使用权利要求1所述的引物组，并使用PCR点突变试剂盒进行点突变PCR扩增，所述点突变PCR扩增结束后，向PCR产物中加入0.5μl限制性内切酶DpnI，混匀后在37℃反应1h，所述限制性内切酶用于酶切模板DNA，从而获得只含有突变位点的克隆质粒的酶切产物；

3)取1～2μl所述酶切产物与所述大肠杆菌DH5感受态细胞混合进行常规转化，所述转化结束后将所述转化后的大肠杆菌涂布在含有氨苄青霉素的抗性LB平皿上36～38℃下培养12～14h，待培养基上长出大肠杆菌的菌落；

4)挑取培养出的大肠杆菌的单菌落进行再次培养同时提取所述大肠杆菌中的质粒进行Sanger法测序以确定正确的阳性克隆质粒；

5)将所述正确的阳性克隆质粒转化到大肠杆菌BL21/DE3中进行蛋白质的诱导表达，获得改造的免疫球蛋白-亲和蛋白。

5.如权利要求4所述的用于基因工程改造免疫球蛋白-亲和蛋白的方法，其特征在于，所述步骤1)所述金黄色葡萄球菌的蛋白A的C结构域的基因序列为SEQ ID No.5所示的多核苷酸序列。

6.如权利要求4所述的用于基因工程改造免疫球蛋白-亲和蛋白的方法，其特征在于，所述步骤5)所述改造的免疫球蛋白-亲和蛋白可以为含有N6T单突变或者N28T单突变或者N6T/N28T双突变的C蛋白单体或者二聚体或者四聚体。