[发明专利]一种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种基因突变及应用此突变基因的诊断试剂，具体涉及一种I型USHER综合征相关基因突变及应用此突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂。 

背景技术

USHER综合征又称遗传性视网膜色素变性-感音神经性耳聋综合征。据统计，先天性重度-极重度感音神经性耳聋患者中约有10％为USHER综合征。临床上将USHER综合征分为3型，I型为先天性重度-极重度耳聋，伴前庭反射消失，10岁左右出现视网膜色素变性，为三种类型中最重的一型。由于该类患者出生后只表现为聋哑，10岁之后才出现视力障碍，因此单纯依靠临床听力检查极易漏诊。如能早期筛查出USHER综合征患者，并在视力障碍出现前进行人工耳蜗植入，则可以有效避免严重视力-听力-言语联合残疾的发生。 

以往由于人们缺乏对USHER综合征遗传病因学的深入认识以及诊断技术，大部分病例均无法明确分子病因，更无法预防其发生。近30年来，伴随耳聋遗传病因学及分子生物学技术的快速发展，至今已有5个I型USHER综合征基因被克隆，丰富了USHER综合征基因谱。但在我国，尽管有众多的USHER综合征患者，其分子病因多不清楚，难以明确诊断，使得USHER综合征防治极其困难。 

研究证实MYO7A基因突变可以引起I型USHER综合征及常染色体隐性遗传性耳聋[1，2]，是最常见的I型USHER综合征致病基因，临床上约50％的I型USHER综合征患者均由该基因突变引起。MYO7A基因位于11号染色体长臂，包含49个外显子，编码2215个氨基酸，基因较大，传统的PCR、测序检测法 耗时、耗力，因此在临床上很难常规检查。如能明确MYO7A基因的致病突变位点，设计针对致病突变位点的检测芯片，则有望解决临床上I型USHER综合征患者基因筛查、诊断的难题。 

已有文献报道MYO7A基因编码DNA的第73位碱基---鸟嘌呤替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第25位甘氨酸突变为精氨酸(c.73G＞A，p.G25R)，为一种I型USHER综合征相关基因突变，但只有2条等位基因同时携带该突变才致病，如果1条基因携带该突变不致病，此发现不足以解决临床上I型USHER综合征患者基因筛查、诊断的难题。寻找新的致病突变，丰富I型USHER综合征基因谱及突变谱将为临床上方便快捷的筛查和诊断I型USHER综合征患者提供重要的靶点及理论依据，是本领域研究工作者孜孜不倦的探究领域。 

发明目的 

有鉴于此，为了解决现有技术中的难题，本发明人经过艰辛的研究，发现了另一种I型USHER综合征相关基因突变，该突变与已知的73位碱基相关基因突变结合筛查，可有效解决上述难题。 

本发明还提供应用上述新发现的I型USHER综合征相关突变与已知相关突变结合的在临床上可有效快捷地筛查、诊断I型USHER综合征的分子病因学诊断试剂。 

本发明提供的一种I型USHER综合征相关基因突变，所述突变为MYO7A基因编码DNA的第462位碱基胞嘧啶替换为腺嘌呤引起编码氨基酸的第154位半胱氨酸突变为终止码(c.462C＞A，p.C154X)。 

本发明提供的一种含有上述I型USHER综合征相关突变基因的耳聋分子病因学诊断试剂，所述诊断试剂包括，1)DNA提取体系试剂盒：被测个体外周静脉血基因组DNA提取；2)PCR扩增体系试剂盒和3)DNA测序体系，所述PCR扩增体系：以外周静脉血提取的基因组DNA为模板，以(a)和(b)两组引物同时进行 PCR扩增， 

具中：(a)组引物为上游引物(5’→3’)：TTGTAGCAGAGGGATATAGGGC，下游引物(5’→3’)：GGGGACTACTCACATTGTCTTCA， 

(b)组引物为上游引物(5’→3’)：CTGGTGGCTGTGAACCCCTA，下游引物(5’→3’)：GCTTGATGGCATTTCCGAC； 

所述DNA测序体系：将PCR扩增产物直接进行DNA测序，并与原MYO7A基因编码DNA序列对比： 

当扩增产物中c.73G＞A和c.462C＞A突变均存在时，为I型USHER综合征患者，当存在突变之一时，为I型USHER综合征携带者，当两突变均不存在时，为健康个体。 

MYO7A蛋白为非常规肌球蛋白，在耳蜗毛细胞静纤毛的形成中发挥了重要作用。