[发明专利]一种高效利用脂肪酸生产甲羟戊酸的方法及构建得到的基因工程菌有效
| 申请号： | 201310473802.X | 申请日： | 2013-10-12 |
| 公开（公告）号： | CN103571785A | 公开（公告）日： | 2014-02-12 |
| 发明（设计）人： | 咸漠;程涛;曹玉锦;邹慧斌 | 申请（专利权）人： | 中国科学院青岛生物能源与过程研究所 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/54;C12N15/52;C12N15/70;C12P7/42;C12P7/04;C12R1/19 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 何自刚;王玉松 |
| 地址： | 266101 山*** | 国省代码： | 山东;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 利用 脂肪酸 生产 甲羟戊酸 方法 构建 得到 基因工程 | ||
1.一种产甲羟戊酸重组大肠肝菌，是在大肠杆菌中过表达脂肪酸转运蛋白基因(fadL)和脂酰辅酶A合成酶基因(fadD)，得到的重组大肠肝菌。
2.根据权利要求1所述大肠杆菌，其特征在于，脂肪酸转运蛋白基因Genbank登录号：AAC75404.2。
3.根据权利要求1所述大肠杆菌，其特征在于，脂酰辅酶A合成酶基因Genbank登录号：AAC74875.1。
4.一种利用脂肪酸生产甲羟戊酸的方法，是在大肠杆菌中导入脂肪酸转运蛋白基因(fadL)和脂酰辅酶A合成酶基因(fadD)，利用重组大肠杆菌发酵生产甲羟戊酸。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，具体步骤如下：
1）获得长链脂肪酸转运蛋白基因(fadL)和脂酰辅酶A合成酶基因(fadD)；
2）构建含有长链脂肪酸转运蛋白基因(fadL)和脂酰辅酶A合成酶基因(fadD)的重组质粒；
3）将步骤2）构建的质粒与质粒pYJM11导入大肠杆菌；
4）利用步骤3）得到的重组大肠肝菌利用脂肪酸发酵生产甲羟戊酸。
6.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述脂肪酸转运蛋白基因Genbank登录号：AAC75404.2。
7.根据权利要求4或5所述方法，其特征在于，所述脂酰辅酶A合成酶基因Genbank登录号：AAC74875.1。
8.根据权利要求5所述方法，其特征在于，具体步骤如下：
1）分别克隆Genbank登录号：AAC75404.2的长链脂肪酸转运蛋白基因(fadL)和Genbank登录号：AAC74875.1的脂酰辅酶A合成酶基因(fadD)；
2）在步骤1）所述基因5’端和3’端分别引入酶切位点，将所述基因克隆到pET-30a载体上，构建重组载体pET-fadL-fadD；
3）将步骤2）得到的重组载体pET-fadL-fadD与pYJM11(pACY-mvaE-mvaS)导入大肠杆菌BL21(DE3)得到重组大肠肝菌；
4）利用步骤3）得到的大肠杆菌利用脂肪酸发酵生产甲羟戊酸。
9.权利要求4所述方法在发酵生产以甲羟戊酸为中间代谢产物产品中的应用。
10.根据权利要求9所述方法，其特征在于，权利要求1所述大肠杆菌用于发酵生产异戊二烯或以异戊二烯为单元合成的萜类化合物。
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