[发明专利]一种产高光学纯度L-乳酸的干酪乳杆菌及其发酵方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种产高光学纯度L-乳酸的干酪乳杆菌及其发酵方法。 

背景技术

干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）属于乳杆菌属，是革兰氏阳性菌，不产芽孢，无鞭毛，不运动，兼性异型发酵乳糖，不液化明胶，最适生长温度为37℃，G+C含量为45.6%～47.2%，菌体长短不一，两端成方形，常成链；菌落粗糙，灰白色，有时呈微黄色，能发酵多种糖。 

由于发酵法生产L-乳酸，虽然产量大，但是L-乳酸的光学纯度低，所以通过紫外诱变和DES诱变来提高L-乳酸的光学纯度是一个经济可行的方法。如何培育出一株高光学纯L-乳酸的突变菌株，能够解决用发酵法L-乳酸光学纯度低的缺点，以此来弥补上述缺陷。 

发明内容：

本发明提供一种干酪乳杆菌，保藏编号为CGMCC No.8029，分类命名为干酪乳杆菌Lactobacillus casei,该菌株于2013年8月15日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。 

上述干酪乳杆菌生产L-乳酸的光学纯度高达98.83。 

本发明还提供了一种所述干酪乳杆菌的应用，是用CGMCC No.8029发酵生产L-乳酸。 

所述发酵生产L-乳酸的优选培养基组成如下：葡萄糖、酵母粉、乙酸钠、磷酸盐、甜菜碱和微量元素液。 

更进一步，优选培养基组成为(g/100mL)：葡萄糖16，酵母粉1，乙酸钠0.2，KH₂PO₄0.1，甜菜碱0.2，MgSo₄·7H₂O0.02，MnSO₄·H₂O0.005，CaCO₃10。 

上述干酪乳杆菌的接种量优选为10%。 

上述发酵温度优选为37℃，摇床培养时间优选为72h。 

本发明的优点在于： 

1、通过诱变方法对干酪乳杆菌进行改造，方法简单、诱变成本低，L-乳酸光学纯度高达98.83%。 

2、诱变后所获得菌株使得运用发酵法生产高光学纯度的L-乳酸成为可能，有利于降低发酵成本。 

3、发酵稳定性较好，经过多次发酵生产，其L-乳酸的产酸能力和纯度比较稳定，不发生较大程度的下降。 

附图说明

图1CGMCC No.8029发酵生产L-乳酸光学纯度色谱图。 

具体实施方式

本发明采用MRS培养基组成（g/L）：蛋白胨10.0，牛肉膏8.0，酵母粉4.0，葡萄糖20.0，磷酸氢二钾2.0，柠檬酸氢二胺2.0，乙酸钠5.0，硫酸镁0.2，硫酸锰0.04，吐温-801.0，pH值5.7±0.2，于118℃灭菌25min。YE培养基：15g酵母粉，20g葡萄糖，1000mL蒸馏水，酵母粉和葡萄糖分别灭菌，冷却后混合，固体YE培养基中加入1.5%琼脂，2%CaCO₃(CaCO₃与培养基分开灭菌)。 

L-乳酸光学纯度测定条件：采用Sumichiral OA-50004.6mm×150mm手性分离柱，流动相为2mmol/L CuSO₄5%异丙醇，流速为1mL/min,柱温35℃，紫外检测波长236nm。 

L-乳酸含量的测定：先将发酵结束后的发酵液混匀，移取发酵液100uL稀释到500倍，10000/min离心1min，用生物传感分析仪测定，将三个平行的摇瓶实验测定后取其平均值。 

菌体浓度的测定：先将发酵过后的发酵液室温静置30min，移取上清液100uL稀释50倍，利用分光光度计在波长600nm处测定菌体OD值，将三个平行的摇瓶实验测样后取其平均值作为OD值的测定结果，发酵液中总的OD值为OD₆₀₀×稀释倍数。 

实施例1：野生型干酪乳杆菌的生长曲线的绘制