[发明专利]一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法

说明书

技术领域

本发明涉及快速分离梓醇的方法，特别涉及三联柱层析技术从中药地黄中快速分离梓醇的方法，属于中药技术领域。

 

背景技术

中药地黄（Rehmanniae Radix）为玄参科（Scrophulariaceae）多年生草本植物地黄（Rehmannia glutinosa Libosch.）的干燥块根，性甘、寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、养阴生津的功效，主治热入营血、温毒发斑、吐血衄血等。药理实验证明，环烯醚萜苷类化学成分是地黄的主要药效物质基础，尤其以梓醇具有突出的抗癌、神经保护、降血糖及抗肝炎病毒等作用，为2010版《中国药典》中地黄的质量控制指标成分。

目前，地黄中梓醇的分离方法主要有三种：一、以水或含水醇提取，回收溶剂后，有机溶剂萃取除杂，水溶液载入大孔吸附树脂或活性炭单一填料，以水和不同浓度乙醇洗脱，收集含有梓醇的流分，减压浓缩，干燥，反复重结晶。例如，中国专利200710159335.8中，将地黄80%乙醇提取液回收乙醇，水分散，石油醚、乙酸乙酯依次萃取除杂，萃余水溶液载入H103大孔吸附树脂后以水和含水乙醇梯度洗脱，收集80%乙醇流分，减压浓缩并干燥，干燥物以甲醇-乙醇混合溶液反复重结晶，最终得到梓醇；二、将水提液进行多级膜分离后，载入活性炭和多种树脂组成的串联柱层析系统，以水和不同浓度乙醇洗脱，收集含有梓醇的流分，减压浓缩，干燥。例如，中国专利200710026330.8中，将水提取液经过微滤、超滤、纳滤三级膜过滤过程，再以活性炭、大孔吸附树脂、阳离子交换树脂和阴离子交换树脂连续柱层析系统进行分离，最终得到纯度约为65%的梓醇产品；三、以水、醇或含水醇提取，初步除杂后，载入大孔吸附树脂柱以水和含水乙醇梯度洗脱，收集含有梓醇的洗脱液，浓缩，再以混合溶剂进行硅胶柱层析分离，收集流份，回收溶剂并浓缩，结晶或重结晶，最终得到梓醇。例如，中国专利201110184807.1，将水提液减压浓缩，浓缩液中加入95%乙醇，静置过夜，上清液浓缩后，载入XAD-16大孔树脂柱，先用水洗脱，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，减压浓缩，浓缩物再如硅胶柱，以乙酸乙酯-甲醇混合溶剂洗脱，收集目标流份，减压浓缩，干燥，含水乙醇重结晶，得到纯度约为95%的梓醇；中国专利200810016005.8、201010529437.6和201110275524.8中，将由鲜地黄制得的含梓醇水溶液，以活性炭或大孔吸附树脂分离，得到粗品，再载入硅胶柱层析用氯仿-甲醇、乙酸乙酯-乙醇或甲醇-乙酸乙酯等混合溶剂洗脱，浓缩，干燥或再以甲醇、丙酮-水进行结晶等操作，得到梓醇。此外，2008年张秀丽等（中国生物工程杂志，第28卷，第1期，P65~69）将鲜地黄匀浆液以95%乙醇温浸提取，提取液浓缩后以D101大孔吸附树脂分离，收集5%乙醇洗脱液，浓缩干燥后，进行硅胶柱层析，用氯仿-甲醇混合溶剂洗脱，浓缩，干燥，得到纯度为90%的梓醇；2010年刘海洋等（中医药信息，第27卷，第1期，P86~88）以80%乙醇加热回流提取，提取液浓缩干燥后，以水溶解，载入H103大孔吸附树脂分离，用水和含水乙醇洗脱，收集含有梓醇的流份，减压浓缩至干，得到纯度约为40%的梓醇，此后用甲醇-乙醇混合溶剂反复重结晶处理，获得了梓醇。

以上方法存在以下几处不足，难以满足规模化生产梓醇的要求：一、以硅胶柱进行分离，填料不能得以反复利用，而且梓醇的极性大，严重的死吸附导致梓醇大量损失；二、纯化过程中使用石油醚、乙酸乙酯、氯仿、甲醇、丙酮等有毒、易燃、管制试剂，环境负担重，管理成本高；三、在进行柱层析前，提取液需要经过浓缩、初步除杂等处理，人力、时间和能源消耗大；四、微滤、超滤、纳滤等膜分离技术资金投入大，运行成本高，而且最终产品的质量不佳。

 

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的以上四点不足，通过联用D101型大孔吸附树脂、H103型大孔吸附树脂和活性炭，提供一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法。

本发明的技术构思如下：