[发明专利]传染性皮下及造血组织坏死病毒的LAMP检测引物组、检测试剂盒及检测方法

权利要求书

1.对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的LAMP检测引物组，其特征在于，包括一对外引物、一对内引物和一对环引物：

所述的一对外引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-F3：GAGACAACCGACGACATC；

IHHNV-B3：TCTCTGATGACGAAGGTGT；

所述的一对内引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-FIP：TTGTGTTCCGCTACTACAGCTCGATCATGGAAGCAATGGA；

IHHNV-BIP：TGAAGGGACTCCCAACGGATCTCACTCTCTTCCAGTCG；

所述的一对环引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-LF：CATCGGTAGGTTCCAGTCG；

IHHNV-LB：CGGACGAAATGGACGGAA。

2.一种对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的检测试剂盒，包括环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶、阳性对照质控品、阴性对照质控品和LAMP检测引物组，其特征在于，所述的LAMP检测引物组包括一对外引物、一对内引物和一对环引物：

所述的一对外引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-F3：GAGACAACCGACGACATC；

IHHNV-B3：TCTCTGATGACGAAGGTGT；

所述的一对内引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-FIP：TTGTGTTCCGCTACTACAGCTCGATCATGGAAGCAATGGA；

IHHNV-BIP：TGAAGGGACTCCCAACGGATCTCACTCTCTTCCAGTCG；

所述的一对环引物，其核苷酸序列为：

IHHNV-LF：CATCGGTAGGTTCCAGTCG；

IHHNV-LB：CGGACGAAATGGACGGAA。

3.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的环介导等温扩增反应液是由10mM dNTP、10×ThermoPol反应缓冲液、150mM MgSO4水溶液按照体积比8：5：2混合而成。

4.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。

5.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的阳性对照质控品为含有对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒非结构蛋白基因NS1片段的T载体克隆，阴性对照质控品为超纯水。

6.根据权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述的检测试剂盒中还含有显色剂，所述显色剂为荧光染料SYTO-9。

7.一种非疾病的诊断和治疗目的的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）采用病毒DNA提取试剂盒提取样品DNA；

（2）使用权利要求1所述的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒的LAMP检测引物组，与环介导等温扩增反应液、DNA聚合酶和样品DNA混合形成扩增反应体系，进行环介导等温扩增反应，以阳性对照质控品和阴性对照质控品分别作为阳性对照和阴性对照；

（3）扩增反应完成后，通过与阳性对照和阴性对照进行对比，判断样品扩增反应体系中是否扩增得到扩增产物，来判断样品中是否含有对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒。

8.根据权利要求7所述的检测方法，其特征在于，所述的通过与阳性对照和阴性对照进行对比，判断样品扩增反应体系中是否扩增得到扩增产物，来判断样品中是否含有对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒，具体为通过浊度仪软件自行分析反应管中的浊度变化来判断反应扩增结果，浊度仪软件界面出现“S”形扩增曲线为阳性，否则为阴性；或者当含有显色剂荧光染料SYTO-9的情况下，在反应管中加入荧光染料SYTO-9，然后将反应管中置于ESE-Quant Tube Scanner中，根据仪器实时读取的荧光信号来判断扩增结果。