[发明专利]一种热毒宁注射液中糖类成分含量的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药注射液的检测方法，特别涉及一种热毒宁注射液中果糖和葡萄糖的含量检测方法。

背景技术

热毒宁注射液(国药准字Z20050217)是江苏康缘药业股份有限公司的独家品种。热毒宁注射液处方由青蒿、金银花、栀子组成，用于急性支气管炎、外感风热所致感冒咳嗽等症，在临床上得到广大医生和患者的欢迎。据陈有根等(3种经典工艺生产的金银花提取物中糖类成分含量比较.中国中医药信息杂志[J].2008，15(2)∶50～52.)、韦性琰等(江西栀子多糖的含量测定及比较.江西中医学院学报[J].2011，23(5)∶51～52.)、薛明等(青蒿多糖的抗肿瘤作用实验研究.时珍国医国药[J].2008，19(4)∶937～938.)报道，青蒿、金银花、栀子中均含有糖类成分，且种类较多。为了更好地控制药品质量，发明人希望能够建立一套完整、有效的检测方法，为此发明人进行了更加细致地研究。

现有文献记载，糖类成分测定多用比色法，包括苯酚—硫酸法、蒽酮—硫酸法、3,5-二硝基水杨酸法(DNS法)。前两种方法的原理是利用多糖在强酸性条件下脱水生成糠醛或其衍生物，然后再与酚类或胺类化合物缩合，生成有特殊颜色的物质的这一性质进行测定。比色法虽然简便，但因硫酸遇水剧烈放热，使显色条件难以控制，影响测定结果。DNS法的原理是在NaOH和丙二醇存在下，3,5-二硝基水杨酸与还原糖共热后被还原生成氨基化合物，在过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈橘红色，在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系。该方法的缺点在于，波长越短，测定灵敏度越高，越适合于检测浓度偏低的样品；波长越长，测定灵敏度越低，但标准曲线的线性范围越宽，对测定较高浓度的样品有利。此外，糖类成分的化学结构也其影响还原能力，因而影响测定结果。

除以上三种方法外，高效液相色谱—蒸发光散射法也被较多的应用于糖类成分的测定中。陈俊等(HPLC-ELSD在中药分析及指纹图谱中的应用.药学实践杂志[J].2009，27(4)∶251～253.)报道，中药的化学成分复杂，部分成分不存在紫外吸收或仅在紫外末端有吸收，加上色谱分离的困难以及流动相带来的干扰，使用传统的紫外检测器对其进行定性定量分析十分困难。ELSD在某种程度上弥补了这方面的不足。而糖类成分多不存在紫外吸收，以前主要采用分光光度法对这类成分进行定量分析，但只能测定总糖含量，灵敏度和准确度较差。HPLC-ELSD方法则可以直接进行单糖的测定。多篇文献也报道，HPLC-ELSD法可以用于食品、药品中糖类成分的测定。但是，HPLC-ELSD法对色谱柱的柱效具有较高的要求，不同类型、不同型号甚至不同厂家的色谱柱对成分的分离都有实质上的影响。而且，就现有文献的报道来看，以应用HPLC-ELSD法检测单味中药材中糖类成分的研究占绝大部分，应用到中药复方制剂的研究较少。

基于以上报道，发明人有针对性的检索了金银花、青蒿、栀子中糖类成分含量测定方法的相关报道。文献记载，科研人员应用紫外分光光度法、苯酚—硫酸法、蒽酮—硫酸法测定栀子多糖的含量，金银花中糖类成分亦采用苯酚—硫酸法测定含量，而对青蒿多糖的研究则侧重其药理活性，含量测定方法未见报道。

在此基础上江苏康缘药业股份有限公司经过对热毒宁注射液进行系统成分分析后，发现糖类成分在成品指纹图谱中清晰可见、且含量较高，主要为葡萄糖和果糖。如何对热毒宁注射液中葡萄糖和果糖的含量进行测定，现有技术没有报道，如果采用目前较为先进的HPLC-ELSD法对热毒宁注射液中的果糖和葡萄糖进行定量检测，如何克服待测成分分离度以及其他成分的干扰，在现有技术中没有报道，所以，建立一种准确、可靠、快速的对热毒宁注射液中葡萄糖和果糖进行测定的方法成为亟待解决的技术问题。

发明内容

为实现上述目的，发明人提供一种HPLC-ELSD法同时测定热毒宁注射液中葡萄糖和果糖含量的测定方法，具体步骤为：

(1)低浓度对照品溶液制备：精密称取果糖和葡萄糖对照品适量，加水溶解并稀释制成含果糖和葡萄糖的低浓度对照品溶液；

(2)高浓度对照品溶液制备：精密称取果糖和葡萄糖对照品适量，加水溶解并稀释制成含果糖和葡萄糖的高浓度对照品溶液；

(3)供试品溶液制备：精密吸取热毒宁注射液，加水稀释、定容，摇匀，作为供试品溶液；