[发明专利]分离脂肪组织活细胞方法、医药组合物及其用途、细胞库

权利要求书

1.一种分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于，包括有下列步骤：

步骤a提供一人类的脂肪组织；

步骤b将该脂肪组织置于一切割装置的封闭容器中；

步骤c使该切割装置对该封闭容器施予一作用力，令该封闭容器中的一预设切削刀具对该脂肪组织执行快速均质切碎，获得一均质化脂肪组织；

步骤d于前述已切碎的该均质化脂肪组织中加入一试剂，进行水解反应；

步骤e将前述经水解反应处理过的该均质化脂肪组织进行过滤、离心分离；及

步骤f将离心分离后的上清液移除，以获取一细胞沉淀物，其中前述步骤b中所述的切割装置是一抛弃式的均质机，前述抛弃式的均质机包含有一抛弃式封闭容器及一动力单元，且该抛弃式封闭容器内具有一切削刀具；前述步骤c均质切碎条件为于15毫升体积的抛弃式封闭容器内置入3公克至6公克脂肪组织，且所述均质机的转速为1200每分钟转数至1500每分钟转数，而作用时间为3分钟至10分钟，以进行快速均质切碎。

2.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：于步骤a前可包含一以磷酸缓冲溶液清洗前述脂肪组织的步骤。

3.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：步骤c均质切碎较佳条件为于15毫升体积的抛弃式封闭容器内置入3公克脂肪组织，进行快速均质切碎。

4.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤d中所述的试剂是选自一胰蛋白酶(Trypsin)、一中性蛋白酶(Dispase)、一胶酶(Gelatase)、一玻尿酸酶(Hyaluronidase)、一第一型胶原蛋白酶(Collagenase type I)或一第四型胶原蛋白酶(Collagenase type IV)所构成群组之一或其组合。

5.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤d中所述的水解反应是全程置于一恒温杂交反应烘箱中进行，且条件为摄氏4度至45度、转速为5每分钟转数至50每分钟转数，以及时间0.5小时至24小时。

6.如权利要求5所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：条件为摄氏37度、转速为15每分钟转数以及时间8小时。

7.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤e中所述离心的条件为400×g、时间10分钟。

8.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤e更包含将过滤掉脂肪组织碎渣后所得一过滤液移入一离心管的步骤，以进行离心分离。

9.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤f中所述的细胞沉淀物是一基质血管层细胞。

10.如权利要求1所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤f之后更包括一步骤g将磷酸缓冲溶液加入前述细胞沉淀物中，清洗前述细胞沉淀物，再次离心以去除含有血水及前述试剂的上清液，获得一清洗后的细胞沉淀物。

11.如权利要求10所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：前述步骤g之后更包括一步骤h将前述清洗后的细胞沉淀物置入一培养基中培养，以获取一扩增的细胞。

12.如权利要求11所述的分离脂肪组织活细胞中的基质血管层细胞的方法，其特征在于：所述培养基包含：一基础培养基、一血清添加物、一第二型纤维母细胞生长因子。