[发明专利]一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒。

背景技术

造血干细胞移植是治疗多种恶性血液病的最有效的手段之一。在移植入健康的造血干细胞之前，通常需要借助各种药物或者放射线对患者体内的恶性血液病细胞进行清除（医学上常称之为预处理），这种大剂量的药物或者放射线往往在杀灭了肿瘤细胞的同时也破坏了患者骨髓内的造血微环境。

骨髓造血微环境位于骨髓腔内，主要指骨髓内的基质细胞（包括成骨细胞、成脂肪细胞、间充质干细胞和内皮细胞等），它们通过分泌各种细胞因子（IFN-γ、IL-1β、IL-17、IL-6、IL-7、VEGF、SCF、TGF-β）和表达表面黏附分子（Angiopoientin-1、β-catenin、CD44、CXCL12、Jagged1、Noctch-1、N-cadherin、VLA-4、VLA-5、Tie-2）来支持造血干细胞的自我更新和多向分化。当患者接受了造血干细胞移植术后，输入的健康的造血干细胞首先归巢到骨髓造血微环境中并且植入，进行增殖，再迁移到脾脏和胸腺等免疫器官内进行造血系统和免疫系统的重建。如果造血干细胞移植术后造血和免疫重建严重迟缓，细胞免疫持续功能低下，将会引起严重感染和白血病复发，甚至导致患者死亡。因此，检测造血干细胞移植术后患者骨髓造血微环境的重建对于评价患者造血系统和免疫系统能否恢复以及恢复的快慢至关重要，可以为优化治疗方案提供有力的科学依据。然而，目前对于骨髓造血微环境的重建还缺乏科学有效的检测方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒。

本发明提供了一种鉴定造血干细胞移植术效果的试剂盒，包括组件A、组件B、组件C、组件D、组件E、组件F、组件G和组件H；所述组件A为用于制备骨髓单个核细胞的物质；所述组件B为用于培养骨髓间充质干细胞形成集落的物质；所述组件C为用于对骨髓间充质干细胞集落进行计数的物质；所述组件D为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成骨细胞的能力的物质；所述组件E为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有分化成成脂肪细胞的能力的物质；所述组件F为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有抑制T淋巴细胞增殖的能力的物质；所述组件G为用于鉴定骨髓间充质干细胞是否具有作为造血干细胞的饲养细胞的能力的物质；

所述组件H为记载有如下判断标准的载体：如果满足如下（1）至（5），造血干细胞移植术后骨髓微环境重建成功：

（1）患者进行造血干细胞移植术后9个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞数量与该患者进行造血干细胞移植术的预处理前的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞数量没有显著差异；

（2）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有分化成成骨细胞的能力；

（3）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有分化成成脂肪细胞的能力；

（4）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有抑制T淋巴细胞增殖的能力；

（5）患者进行造血干细胞移植术后6个月的骨髓样本中的骨髓间充质干细胞具有作为造血干细胞的饲养细胞的能力。

所述（4）中，所述“抑制T淋巴细胞增殖”指的是“PHA或同种异体T淋巴细胞刺激引起的T淋巴细胞增殖”。

所述（4）和/或（5）中，所述骨髓间充质干细胞具体可为转至第0-6代的骨髓间充质干细胞，具体可为转至第4代的骨髓间充质干细胞。

所述组件A为人淋巴细胞分离液或所述组件A包括人淋巴细胞分离液。

用所述组件A制备骨髓单个核细胞的方法具体如下：

（1）用PBS缓冲液吹打悬浮骨髓样本，得到细胞悬液；

（2）取试管，加入4毫升人淋巴细胞分离液和4毫升步骤（1）得到的细胞悬液，保持界面完整，1500rpm离心15分钟，取骨髓单个核细胞层（即自上而下的第二层）。

所述组件B为含5-20%（具体可为10％）体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基或所述组件B包括含10％体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基。

用所述组件B培养骨髓间充质干细胞形成集落的方法具体如下：取6孔培养板，按照2×10⁵个细胞/平方厘米的密度接种骨髓单个核细胞，采用含5-20%（具体可为10％）体积份胎牛血清的低糖DMEM培养基，在35-38℃、5-15%CO₂条件下（具体在37℃、5%CO₂条件下）培养14天，每隔两天全量更换相同的培养基。