[发明专利]一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒，由DNA提取试剂和PCR反应试剂组成，其特征是所述DNA提取试剂和PCR反应试剂分别为：

（1）DNA提取试剂成分为5-15mM Tris、0.5-1.5mM EDTA的pH8.0的TE缓冲液；蛋白酶K，浓度15-20mg/mL；100%的氯仿；100%的异丙醇；乙醇，浓度70%；双蒸水；

（2）PCR反应试剂分装于若干反应管，每个PCR反应管中含有10×PCR反应缓冲液2.5μL，浓度为10μM的dNTPs0.5μL，浓度为5U/μL的Taq DNA聚合酶0.3μL，浓度为10μM的特异性寡核苷酸引物A0.5μL，10μM的特异性寡核苷酸引物B0.5μL，灭菌去离子水19.2μL，其中——

引物A：5’-CAGCGAGGAGGAAAGGTTGGTGGT-3’，

引物B：5’-AAGCCACGCCTCAAGGGCACAA-3’。

2.用权利要求1所述的试剂盒检测舒伯特气单胞菌的方法，步骤为：（1）用所述提取试剂提取样品中的DNA；（2）用所述反应试剂对所述DNA作PCR扩增；（3）所述扩增产品作凝胶电泳；其特征是所述PCR扩增过程为95℃预变性3min；98℃变性10s，68℃复性延伸30s，循环35次；最后72℃延伸5～10min；所述凝胶电泳后观察到413bp扩增产物。