[发明专利]一种ApoB100酵母重组疫苗及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201310485936.3 | 申请日： | 2013-10-16 |
| 公开（公告）号： | CN103520713A | 公开（公告）日： | 2014-01-22 |
| 发明（设计）人： | 张智英;麻丽霞;李欣憶;张婷婷;张优优;刘中天 | 申请（专利权）人： | 西北农林科技大学 |
| 主分类号： | A61K39/00 | 分类号： | A61K39/00;A61P9/10;A61P3/06;C12N15/81;C12N1/19;C12R1/865 |
| 代理公司： | 西安通大专利代理有限责任公司 61200 | 代理人： | 汪人和 |
| 地址： | 712100 *** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 apob100 酵母 重组 疫苗 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种ApoB100酵母重组疫苗，其特征在于，该酵母重组疫苗以酵母作为宿主细胞，转染包含ApoB100基因片段的真核表达载体。
2.如权利要求1所述的ApoB100酵母重组疫苗，其特征在于，所述的ApoB100基因片段的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。
3.如权利要求1或2所述的ApoB100酵母重组疫苗，其特征在于，所述的真核表达载体为JMB88-HA-OVA-hApoB100，是将ApoB100基因片段克隆到JMB88-HA-OVA-MCS载体中的OVA的下游而得到的；
所述的酵母为酵母JMY1。
4.如权利要求3所述的ApoB100酵母重组疫苗，其特征在于，该酵母重组疫苗能够表达OVA-ApoB100融合蛋白，并将表达的ApoB100肽递呈给抗原递呈细胞，诱导免疫反应，产生针对ApoB100的抗体。
5.一种真核表达载体，其特征在于，该真核表达载体为JMB88-HA-OVA-hApoB100，是将ApoB100基因片段克隆到JMB88-HA-OVA-MCS载体中而得到的。
6.一种ApoB100酵母重组疫苗的制备方法，其特征在于，包括以下操作：
1）以人基因组为模板克隆ApoB100基因片段，并将ApoB100基因克隆到真核表达载体JMB88-HA-OVA-MCS当中，构建真核表达载体JMB88-OVA-hApoB；
2）将真核表达载体JMB88-OVA-hApoB100转染到酵母菌株当中，并筛选阳性克隆；
3）将阳性克隆接种到液体SD培养基中，当细胞最佳密度达到0.5时加入0.5mM的硫酸铜溶液进行诱导表达；
4）诱导表达后离心收集酵母细胞并进行洗涤，然后将酵母细胞在56℃灭活1h，得到ApoB100酵母重组疫苗。
7.如权利要求1所述的ApoB100酵母重组疫苗的制备方法，其特征在于，所述的真核表达载体JMB88-OVA-hApoB100的构建包括：
以人基因组DNA为模板，以上游引物hApoB-F、下游引物hApoB-R为引物对扩增ApoB100基因片段，Bgl Ⅱ/Xho Ⅰ双酶切得到的ApoB100基因片段，并与经同样双酶切后的酵母真核表达载体JMB88-HA-OVA-MCS连接，16℃连接过夜，构建质粒JMB88-HA-OVA-hApoB100。
8.如权利要求1所述的ApoB100酵母重组疫苗的制备方法，其特征在于，所述的真核表达载体JMB88-OVA-hApoB100是通过LiAc的方法转染到酵母菌株JMY1当中，然后将转染后的菌体均匀涂布并在基本SD固体培养基上进行筛选。
9.权利要求1所述的ApoB100酵母重组疫苗在制备防治冠心病、动脉粥样硬化的药物中的应用。
10.权利要求1所述的ApoB100酵母重组疫苗在制备降低低密度脂蛋白胆固醇、提高高密度脂蛋白胆固醇药物中的应用。
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