[发明专利]一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法

权利要求书

1.一种异源精子诱导泥鳅雌核发育四倍体鱼苗的方法，其步骤如下：

A、亲本的选取与人工催产

选择体形正常、外表无伤、体质健壮、腹部膨大有弹性、卵巢轮廓明显的四倍体雌性泥鳅，雄性团头鲂胸鳍珠星明显、有粗糙感、轻压腹部有白色精液从生殖孔流出；

B、精子的遗传灭活

采集团头鲂精子，镜检选取活力在90%以上的用于紫外线灭活，团头鲂精液1ml，用Hank’s溶液按照1:4体积比稀释，置于经预冷的直径75mm干燥培养皿中，精液厚度为0.1-0.2mm，然后置于2支15W紫外灯下处理；灯管与静液面距离10-12mm，灭活时间20-25min，精子的活力水平下降到30%时，停止光照，处理过的精液置于4℃冰箱中，避光保存备用；

C、团头鲂精子诱导泥鳅雌核发育

将稀释的精液200-600μL 加入到含5-30ml 四倍体泥鳅未受精卵的瓷盆中，混合均匀，随后加入5-10ml 7% w/v 生理盐水，继续混匀后，加入50-200ml 曝气水；

D、冷休克处理：

采用0-4℃冰水混合物在授精后2-10min进行冷休克处理，处理持续时间20-55min；

F.孵化

受精卵经冷休克处理后，转移至23℃的水浴中复温；最后在曝气水中孵化；

所述的曝气水为水温23-25℃，溶氧6.0-7.0mg/L，pH值在7.8-8.2的自来水。

2.根据权利要求2所述的方法，其冷处理条件为：0-4℃冰水混合物在授精后7-8min进行冷休克处理，处理持续时间30min。