[发明专利]一种脱氮复合菌剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种脱氮复合菌剂及其制备方法和应用，属于环境污染物生物技术处理领域。

背景技术

目前，畜禽养殖业集约化、规模化的快速发展，随之而带来的环境污染问题也越发严重。其中畜禽养殖废水中氮污染问题最为突出，多数养殖场废水中的氨氮都超标，超标率为80%以上，氮超标所引起水体的富营养化以及严重的生态环境污染已经成为世界性的问题。因此，对畜禽养殖废水中氮降解的研究，就显得尤为迫切。氨氮在水体中常转化为硝酸氮和亚硝酸氮，它们仍能导致水体富营养化，并且亚硝酸态氮可以通过亚硝酸氨化作用再次转化为氨氮，同时亚硝酸氮也是一种致癌物，对动物和人类健康都存在很大的威胁；而饮水中硝酸态氮超过10mg/L时不宜饮用，它可氧化亚铁离子成三价铁离子，引起婴儿高铁血红蛋白症，因此只有彻底去除水溶解态的氮才能免除危害因此，废水的氨氮脱除己成为环境工作者研究的热点之一，其中生物脱氮法是广泛应用的一种经济高效的方法。

异养硝化-好氧反硝化的实质为一种同步硝化反硝化的实现手段。将同时具有硝化和反硝化功能的脱氮微生物投入后，可以加强污水处理效果的应用，进行污水处理的生物强化；但是硝化-反硝化的实现受制于能同时异养硝化-好氧反硝化菌株的分离，因此近年来国内研究学者大部分集中在异养硝化-好氧反硝化菌株的分离和筛选研究中，而将筛选出的异养硝化-好氧反硝化菌株进行规模化生产与应用，目前未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种脱氮复合菌剂及其制备方法和应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种脱氮复合菌剂，包括：

CPZ24(Rhodococuus pyridinivorans)    1×10⁸-10×10⁸cfu/mL；

CPZ56(Shinella zoogloeoides)          1×10⁸-10×10⁸cfu/mL；

WL12(Pseudomonasspp.)              1×10⁸-5×10⁸cfu/mL；

总菌数为3×10⁸-25×10⁸cfu/mL。

所述CPZ24(Rhodococuus pyridinivorans)、CPZ56(Shinella zoogloeoides)、WL12(Pseudomonasspp.)均为北京沃土天地生物科技有限公司已出售的，本领域技术人员可购买的产品。

作为本发明优选的实施方式，所述脱氮复合菌剂，由如下组成：

CPZ24(Rhodococuus pyridinivorans)    1×10⁸-8×10⁸cfu/mL；

CPZ56(Shinella zoogloeoides)          1×10⁸-8×10⁸cfu/mL；

WL12(Pseudomonasspp.)              1×10⁸-4×10⁸cfu/mL；

总菌数为3×10⁸-20×10⁸cfu/mL。

本发明还提供了上述脱氮复合菌剂的制备方法，包括如下步骤：

1).固体斜面培养：将CPZ24、CPZ56、WL12分别接种于固体培养基上，于30℃无菌环境下培养1-3天，使菌株活化；

2).一级种子培养：将步骤1）活化的菌株，在无菌条件下分别接种于液体培养基中，均于30℃，150-180rpm下培养2-3天时，单菌种液体培养OD₆₀₀值达到2.0-4.0之间时停止培养，制得一级种子；

3).二级种子培养：按液体培养基的体积比为10-20%的接种量，将步骤2）所得一级种子分别接种于发酵罐中，30℃条件下，培养2-3天，制得二级种子；

4).混合发酵培养：按液体培养基的体积比为10-20%的接种量，将步骤3）得到的二级种子接种于发酵罐中，进行高密度发酵培养，获得菌剂。

其中，步骤1)中所用的固体培养基为牛肉膏蛋白胨培养基：具体培养基配方为：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml，琼脂15-20g，pH7.0-7.2。