[发明专利]七鳃鳗李蛋白、制备方法及在制备预防和治疗肿瘤疾病药物中的应用

权利要求书

1.一种七鳃鳗李蛋白，其特征在于是从七鳃鳗李氏小体细胞培养液分离得到的蛋白，所述蛋白具有一个凝集素结构域（Jacalin_like domain）和一个成孔毒素结构域（Pore-forming toxin_like domain）。

2.一种如权利要求1所述七鳃鳗李蛋白的制备方法，其特征在于按如下步骤进行：

a．取新鲜的李氏小体，放入胰蛋白酶中4℃过夜消化；

b. 收集消化后的细胞，PBS清洗两次；

c．转入无血清的1640培养液中培养72小时；

d. 收集七鳃鳗李氏小体细胞的培养液，加入终浓度为2 mmol/L的苯甲基磺酰氟；

e．以0.1 M KCl/ buffer A为透析液，在4℃条件下对所收集的细胞培养液透析2 hr~O/N，共透析3次；

f．透析后的样品通过0.45μm滤膜过滤；

g. 将过滤后样品上样至柱体积为10 ml的Macro-Prep Ceramic Hydroxyapatite Type I 80 μm羟基磷灰石吸附层析柱中，线性梯度洗脱 0～250 mM KPB pH7.0/0.1 M KCl / buffer A ，流速为1.0 ml/min，分管收集2.5 ml/管，共80管；

h．合并第8~23管洗脱液，置于1L buffer B中4℃下透析，2 hr~O/N更换一次透析液，共透析3次； 

i．透析后的样品通过0.45 μm滤膜过滤；

j．取20 ml Q Sepharose  Fast Flow填料灌装层析柱，用于对上一步样品进行离子交换层析，将过滤后样品全部上样，线性梯度洗脱 0～0.3 M KCL / buffer B ，流速1.0 ml/min，分管收集2.5 ml/管，80管；

k．收集29-35管，使用PBS透析2 hr~O/N，共透析3次，得到产物即为纯化的七鳃鳗李蛋白。

3.一种如权利要求1所述的七鳃鳗李蛋白在制备预防和治疗肿瘤疾病药物中的应用。

4. 一种如权利要求1所述七鳃鳗李蛋白的重组蛋白以及对七鳃鳗李蛋白进行分子修饰、突变、截短或七鳃鳗李蛋白与其它分子或多肽融合改造后的蛋白在制备预防和治疗及肿瘤疾病药物中的应用。