[发明专利]一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法

权利要求书

1.一种软骨染色液，其特征在于：该染色液的pH范围为5-7，且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新蓝。

2.根据权利要求1所述的软骨染色液，其特征在于：该染色液中还包括无水乙醇、冰醋酸和水。

3.根据权利要求2所述的软骨染色液，其特征在于：每升该染色液中包括阿利新蓝为0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL。

4.一种骨骼染色方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

401：染色剂的制备：染色剂包括软骨染色液和硬骨染色液，软骨染色液中包括阿利新蓝、无水乙醇、冰醋酸和水，硬骨染色液中包括茜素红、无水乙醇和水；

402：经过脱脂后的骨骼浸泡于软骨染色液中染色2-3天；

403：将骨骼由软骨染色液中取出后，使用70%的酒精溶液反复进行清洗，直至冲洗液颜色无色；

404：清洗后的骨骼浸泡在硬骨染色液中染色2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼。

5.根据权利要求4所述的骨骼染色方法，其特征在于：步骤401中，每升软骨染色液中包括阿利新蓝0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL；每升硬骨染色液中包括茜素红0.04g-0.06g、无水乙醇690mL-710mL和水290mL -310mL。

6.一种利用骨骼染色方法制备胚胎骨骼标本的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

601：取动物胚胎并剥去表皮，去除骨骼和腹腔内的脂肪，并清洗干净；

602：标本固定：将处理后的骨骼整理好姿势后，浸泡于95%的酒精固定液中固定1天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2-3天，直至标本脱水硬化；

603：脱脂：将固定后的标本浸泡于丙酮溶液内脱脂2-3天，取出后用水持续冲洗8-16小时，直至标本可以沉入水底为止；

604：染色：将标本浸泡于软骨染色液中2-3天，取出后使用70%的酒精溶液反复进行清洗，直至冲洗液颜色无色，然后将标本浸泡于硬骨染色液中2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼标本；

605：脱色：将染色后的标本依次浸泡于不同浓度的KOH溶液中，直至肌肉颜色变浅，骨组织变为红色；

606：将脱色后的标本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液与丙三醇的梯度溶液中，每次均以标本沉入梯度溶液底部为准，最终将标本置于纯甘油中进行密封保存。

7.根据权利要求6所述的利用骨骼染色方法制备胚胎骨骼标本的方法，其特征在于：步骤604中，每升软骨染色液中包括阿利新蓝0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL；每升硬骨染色液中包括茜素红0.04g-0.06g、无水乙醇690mL -710mL和水290mL-310mL。

8.根据权利要求6所述的利用骨骼染色方法制备胚胎骨骼标本的方法，其特征在于：步骤605中，将染色后的标本浸泡于2%的KOH溶液中8-12小时，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12-24小时，最后浸泡于1%的KOH溶液中2-3天，直至肌肉颜色变浅，骨组织变为红色。

9.根据权利要求6所述的利用骨骼染色方法制备胚胎骨骼标本的方法，其特征在于：步骤606中，1%的KOH溶液与丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分别为：1:4、2:3、3:2、4:1，标本在梯度溶液中浸泡的时间为1-2天。