[发明专利]一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法

说明书

技术领域

本发明涉及标本制备领域，具体而言，涉及一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法。

背景技术

家禽的骨骼在生长发育过程中不形成骨骺的次级骨化中心，所以无骨骺和骨骺软骨，骨的加长主要依赖于骨端软骨的增生和骨化。家禽的骨骼与哺乳动物等差异较大，家禽的骨骼具有强度大而重量轻的特点，含有较多的无机钙盐，并且躯干部有些骨已经互相愈合。

动物标本在生物学科研、教学以及科普工作中占有特别重要的地位，骨骼标本是研究动物骨骼的形态结构及其与其他器官相互关系的主要材料，动物骨骼的标本和骨骼标本制作技术也见于一些教科书和杂志文章，传统的骨骼标本制作方法一般包括：剔肉、去骨髓、腐蚀、漂白、串装等步骤，制作过程繁琐，尤其是剔肉和最后的串装步骤，工作量大且需要操作者具有较强的专业知识和操作技能，否则会造成骨骼的损坏和骨骼安装的错误，制作周期长，另外传统的骨骼制作方法主要适用于体型相对较大的动物，以及骨骼发育基本完成的动物，对于骨骼尚未钙化及硬化的胚胎则难以完成标本制作工作，实用性较低，应用范围比较局限，不适用于类似家鸭这种体型较小的动物，所以不能被人们广泛使用。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种软骨染色液、骨骼染色方法以及利用该方法制备胚胎骨骼标本的方法。

本发明实施例中提供了一种软骨染色液，该染色液的pH范围为5-7，且每升染色液中至少含有0.14g的阿利新蓝。

进一步的，该染色液中还包括无水乙醇、冰醋酸和水。

优选的，每升该染色液中包括阿利新蓝为0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL。

本发明实施例中还提供了一种骨骼染色方法，该方法包括以下步骤：

401：染色剂的制备：染色剂包括软骨染色液和硬骨染色液，软骨染色液中包括阿利新蓝、无水乙醇、冰醋酸和水，硬骨染色液中包括茜素红、无水乙醇和水；

402：经过脱脂后的骨骼浸泡于软骨染色液中染色2-3天；

403：将骨骼由软骨染色液中取出后，使用70%的酒精溶液反复进行清洗，直至冲洗液颜色无色；

404：清洗后的骨骼浸泡在硬骨染色液中染色2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼。

优选的，步骤401中，每升软骨染色液中包括阿利新蓝0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL；每升硬骨染色液中包括茜素红0.04g-0.06g、无水乙醇690mL -710mL和水290mL-310mL。

本发明实施例中进一步提供了一种利用骨骼染色方法制备胚胎骨骼标本的方法，该方法包括以下步骤：

601：取动物胚胎并剥去表皮，去除骨骼和腹腔内的脂肪，并清洗干净；

602：标本固定：将处理后的骨骼整理好姿势后，浸泡于95%的酒精固定液中固定1天，然后再次浸泡于新的95%的酒精固定液中固定2-3天，直至标本脱水硬化；

603：脱脂：将固定后的标本浸泡于丙酮溶液内脱脂2-3天，取出后用水持续冲洗8-16小时，直至标本可以沉入水底为止；

604：染色：将标本浸泡于软骨染色液中2-3天，取出后使用70%的酒精溶液反复进行清洗，直至冲洗液颜色无色，然后将标本浸泡于硬骨染色液中2-3天，然后取出，即得到染色后的骨骼标本；

605：脱色：将染色后的标本依次浸泡于不同浓度的KOH溶液中，直至肌肉颜色变浅，骨组织变为红色；

606：将脱色后的标本依次浸泡于不同比例的1%的KOH溶液与丙三醇的梯度溶液中，每次均以标本沉入梯度溶液底部为准，最终将标本置于纯甘油中进行密封保存。

进一步的，步骤604中，每升软骨染色液中包括阿利新蓝0.14g-0.16g、无水乙醇690mL-710mL、冰醋酸40mL-60mL和水230mL-270mL；每1升硬骨染色液中包括茜素红0.04g-0.06g、无水乙醇690mL -710mL和水290mL-310mL。

进一步的，步骤605中，将染色后的标本浸泡于2%的KOH溶液中8-12小时，再浸泡于1.5%的KOH溶液中12-24小时，最后浸泡于1%的KOH溶液中2-3天，直至肌肉颜色变浅，骨组织变为红色。

进一步的，步骤606中，1%的KOH溶液与丙三醇所形成的梯度溶液的配比比例分别为：1:4、2:3、3:2、4:1，标本在梯度溶液中浸泡的时间为1-2天。