[发明专利]三氧化二砷隐形免疫靶向抗肿瘤制剂的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，尤其涉及一种包封抗癌药物As₂O₃的制备方法。

背景技术

三氧化二砷（As₂O₃）是传统中药砒霜中的主要活性成分，研究发现As₂O₃对急性早幼粒细胞白血病（APL）具有显著的疗效，可诱导APL细胞凋亡。最近的研究表明As₂O₃对恶性实体瘤也具有强大的抗肿瘤作用，尤其是As₂O₃抗肝癌的作用受到国内外肿瘤界的广泛关注。但是使用As₂O₃作为抗肝癌药物，仍然存在着一定的问题：（1）血浆中砷的半衰期很短，给药后短时间内就会被迅速清除；（2）药物本身具有毒性，这也就限定了其直接使用时剂量必须要低，相应的抗癌效果也随之降低。

针对上述问题，国内外的研究者提出了将砷化物制成缓释制剂，以延长其在体内的半衰期，其中以脂质体的研究最为广泛。然而脂质体不稳定，包封药物后容易泄露，带来一定的毒副作用。另外传统的缓释制剂无靶向性，给药后分布于全身各个器官，很大程度上削弱了药物的抗癌效果；同时药剂在进入人体后，难以逃避人体免疫系统中巨噬细胞对其的吞噬作用，使得最终达到病变部位发挥药效的药剂大打折扣。因此，提出一种可以高效、稳定地包封As₂O₃的隐形免疫靶向抗肿瘤制剂，提高其抗癌效果，具有十分重大的意义。

发明内容

本发明的目的在于克服抗癌药物As₂O₃在使用过程中存在的不足，从而提出一种新颖、高效、隐形、靶向的As₂O₃抗肿瘤制剂的制备方法。

本发明的步骤如下：

    1）将As₂O₃溶于氢氧化钠水溶液中，配成含As₂O₃浓度为10~100mg/mL的砷溶液，作为水相；

    2）将乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）溶于三氯甲烷中，作为油相；

    3）将水相在磁力搅拌下加入到油相中，然后冰浴乳化超声，形成W/O初乳；

    4）将W/O初乳与第一份泊洛沙姆的水溶液混合，冰浴乳化超声形成W/O/W复乳；

    5）将W/O/W复乳与第二份泊洛沙姆水溶液均匀混合后，蒸发除去有机溶剂，离心收集沉淀、去离子水洗涤，冷冻干燥得载三氧化二砷纳米粒。 

6）将上述载三氧化二砷纳米粒分散于水中，加入N-羟基琥珀酰亚胺（NHS）活化后，与双端氨基聚乙二醇（NH₂-PEG-NH₂）、乳糖酸（LA）和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）在室温下磁力搅拌反应，离心收集沉淀，即得三氧化二砷隐形免疫靶向抗肿瘤制剂。

本发明采用一种可生物降解、生物相容性良好的乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）作为包封材料，采用双乳化-溶剂挥发法制得载三氧化二砷纳米粒。通过化学键共价偶联的方法在载三氧化二砷纳米粒表面修饰两亲性聚乙二醇（PEG），赋予其“隐形”功能，通过表面同步修饰LA，赋予其免疫靶向性。最终获得的三氧化二砷隐形免疫靶向抗肿瘤制剂微粒尺寸均一，形貌可控，分散性好，包封率可达90%以上。在体外可稳定释放45天，具备缓释功能，是一种新颖、高效的隐形免疫靶向As₂O₃制剂，可望应用于肝癌的治疗。

另，步骤1）中，所述氢氧化钠水溶液的质量百分比为4%，以增大As₂O₃的溶解度。

步骤2）中，所述乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）的浓度为30～50mg/mL，以提高As₂O₃包封率。

步骤3）中，所述水相和油相的混合体积比为1：10，超声功率为180W，超声时间为60s，以形成均匀的W/O初乳液。

步骤4）中，第一份泊洛沙姆水溶液的质量百分比浓度为3%，超声功率为360W，超声时间为90s，以形成分散均匀的W/O/W复乳液。

步骤5）中，第二份泊洛沙姆水溶液的质量百分比浓度为0.3%，将W/O/W复乳与第二份泊洛沙姆水溶液混合时以机械搅拌，速度为1200rpm，以进一步分散稳定W/O/W复乳。