[发明专利]用于SMA基因筛查的引物、探针及其使用方法无效

专利信息
申请号: 201310509147.9 申请日: 2013-10-25
公开(公告)号: CN103555835A 公开(公告)日: 2014-02-05
发明(设计)人: 曾骥孟;庄建立;刘斌;赖金娇 申请(专利权)人: 芮宝生物医药科技(厦门)有限公司
主分类号: C12Q1/68 分类号: C12Q1/68;C12N15/11
代理公司: 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(普通合伙) 33243 代理人: 张向飞
地址: 361115 福建省厦门市*** 国省代码: 福建;35
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摘要:
搜索关键词: 用于 sma 基因 引物 探针 及其 使用方法
【权利要求书】:

1.用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针,选自如下任一组合:

第一种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:13;

第二种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:13;

第三种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:16;

第四种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:16。

第五种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:13;

第六种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:13;

第七种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:16;

第八种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:16。

2.权利要求1所述的用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针在人SMA基因筛查中的应用。

3.根据权利要求2所述的用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针在人SMA基因筛查中的应用,其特征在于,包括如下步骤:

(1)样品的DNA提取;

(2)荧光PCR扩增:

PCR体系如下:

PCR反应条件如下:

95℃预变性5分钟;95℃变性30秒,60℃退火60秒,40个循环;

(3)检测:

采用实时PCR扩增仪于每个循环步骤的退火阶段检测FAM和HEX荧光信号,得到SMN1和β-actin的标准曲线,进而通过标准曲线得到待测样品的SMN1基因和β-actin基因的拷贝数;

(4)结果判定:

要求SMN1和β-actin的标准曲线的相关系数r值大于0.99;

根据步骤(3)得到的SMN1和β-actin的拷贝数,计算SMN1与β-actin的拷贝数比;如果比值为0.9~1.6,则表明待测样品的提供者为正常人,比值为0.4~0.6,则表明待测样品的提供者为携带者。

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