[发明专利]用于SMA基因筛查的引物、探针及其使用方法无效
申请号: | 201310509147.9 | 申请日: | 2013-10-25 |
公开(公告)号: | CN103555835A | 公开(公告)日: | 2014-02-05 |
发明(设计)人: | 曾骥孟;庄建立;刘斌;赖金娇 | 申请(专利权)人: | 芮宝生物医药科技(厦门)有限公司 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/11 |
代理公司: | 宁波市鄞州盛飞专利代理事务所(普通合伙) 33243 | 代理人: | 张向飞 |
地址: | 361115 福建省厦门市*** | 国省代码: | 福建;35 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 sma 基因 引物 探针 及其 使用方法 | ||
1.用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针,选自如下任一组合:
第一种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:13;
第二种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:13;
第三种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:16;
第四种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:7、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:9和探针2:SEQ ID No:16。
第五种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:13;
第六种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:11、引物4:SEQ ID No:12、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:13;
第七种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:1、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:16;
第八种组合:含有以下六个序列表中序列编号所示的DNA序列:引物1:SEQ ID No:2、引物2:SEQ ID No:8、引物3:SEQ ID No:14、引物4:SEQ ID No:15、探针1:SEQ ID No:10和探针2:SEQ ID No:16。
2.权利要求1所述的用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针在人SMA基因筛查中的应用。
3.根据权利要求2所述的用于运动神经元存活基因1(SMN1)筛查的引物和探针在人SMA基因筛查中的应用,其特征在于,包括如下步骤:
(1)样品的DNA提取;
(2)荧光PCR扩增:
PCR体系如下:
PCR反应条件如下:
95℃预变性5分钟;95℃变性30秒,60℃退火60秒,40个循环;
(3)检测:
采用实时PCR扩增仪于每个循环步骤的退火阶段检测FAM和HEX荧光信号,得到SMN1和β-actin的标准曲线,进而通过标准曲线得到待测样品的SMN1基因和β-actin基因的拷贝数;
(4)结果判定:
要求SMN1和β-actin的标准曲线的相关系数r值大于0.99;
根据步骤(3)得到的SMN1和β-actin的拷贝数,计算SMN1与β-actin的拷贝数比;如果比值为0.9~1.6,则表明待测样品的提供者为正常人,比值为0.4~0.6,则表明待测样品的提供者为携带者。
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