[发明专利]OX40/TRAIL融合蛋白

说明书

本申请是申请日为2010年3月11日、申请号为201080020665.9、题为“OX40/TRAIL融合蛋白”的专利申请的分案申请。

发明背景

正信号和负信号的复杂相互作用调控T细胞活化和T细胞效应子功能的维持。TNF配体/TNF受体超家族的成员在这种信号矩阵中显示重要作用，桥连（bridging）免疫系统的细胞与其他器官系统的细胞。这样做，TNF超家族成员通过影响细胞存活和死亡、细胞分化以及炎症，有助于组织稳态和致病机制。从自身免疫致病机制的角度看，引起关注的TNF配体超家族成员是TNF相关诱导凋亡配体（TRAIL）和OX40配体。

TRAIL结合数种不同的TNF受体超家族的关联受体，一些受体导致触发细胞内信号通路，而其他受体仅仅充当诱饵受体。人类中的触发受体是TRAIL-R1、TRAIL-R2和护骨蛋白，而在小鼠中，唯一的触发受体是DR5。实际上，免疫系统的所有细胞（T淋巴细胞、B淋巴细胞、天然杀伤细胞、树突细胞、单核细胞、粒细胞）响应于干扰素和其他活化信号，上调表面TRAIL和/或释放储存在分泌小泡中的可溶性TRAIL。TRAIL在多种动物模型中抑制自身免疫。TRAIL抑制实验性自身免疫性脑炎（EAE）——多发性硬化（MS）的小鼠模型——的能力的证据来自对TRAIL-/-敲除小鼠调用可溶性TRAIL受体（sDR5），或中和能阻断TRAIL功能的抗-TRAIL mAb以及共表达TRAIL和致病性MOG（髓鞘少突胶质细胞糖蛋白肽）的源自胚胎干细胞的树突细胞的实验。引人注意的是，在MS患者中，可溶性TRAIL表现为IFN-β治疗的响应标记，，并且最可能响应治疗的那些可溶性TRAIL在治疗后表现出早期和持续的可溶性TRAIL诱导。然而，TRAIL对MS/EAE的影响可能更复杂，例如，TRAIL可能促进脑细胞凋亡的暗示。TRAIL和FasL都与T细胞抑制和T细胞凋亡的诱导有关。

CD134，又称为OX40受体，是TNF受体超家族的成员，主要被发现于活化的T细胞（Lamb等，1999Cytometry38:238-243），而其配体OX40L（也是TNF受体超家族的成员）在活化的B细胞、树突细胞和内皮细胞上表达。OX40L:OX40信号转导也与效应记忆细胞存活和功能相关(Gramaglia et a.,2000J Immunol165:3043-3050);(Soroosh等，2006J Immunol176:5975-5987);(Soroosh等，2007J Immunol179:5014-5023)。

多发性硬化是一种衰弱性神经病，尽管治疗选择不断扩大，对更有效的治疗药剂的仍然具有迫切需要。尽管MS的确切病因未知，其致病机理和临床发展的关键特征正在显现。致病性效应T细胞被认为是导致该疾病的关键，因此许多治疗途径集中在这些细胞上，目标是例如阻断这些细胞活化和再活化、从较大的T细胞库中除去这些细胞以及干扰它们转移到CNS内的致病部位。

中枢神经系统（CNS）的自身免疫脱髓鞘型疾病的局部基因治疗在数年内已经极大发展。由于这些疾病的损害遍布整个CNS，MS和EAE的局部免疫基因治疗已变成可行的选择。与全身递送途径相比，将免疫基因局部施用到CNS更有效。在整合入阳离子脂质后注射裸DNA导致瞬时表达。复制缺陷型病毒载体例如腺病毒载体或HSV载体的使用导致可靠的蛋白质表达和成功的EAE治疗。因此基因转移成为一种可行的选择，特别是在需要免疫基因的局部表达时，例如在关节、CNS和其他身体空间/分区中。

需要的是提供与每个重要信号轴相关的活性兴奋丛的融合蛋白，用于治疗自身免疫性疾病，包括多发性硬化，用于全身性或局部施用。

发明内容

因此，在一方面，本发明提供包括第一结构域和第二结构域的融合蛋白，其中第一结构域是与OX40配体结合的多肽，而第二结构域是与TRAIL受体结合的多肽。

在另外的方面，本发明涉及包含上述融合蛋白的药物组合物，以及通过施用本发明的融合蛋白治疗或改善需要这种治疗的患者中的自身免疫性疾病、同种免疫性疾病或癌症的方法。

在进一步的方面，本发明涉及抑制患者中T细胞增殖和分化的方法，所述方法包括将OX40/TRAIL融合蛋白施用给需要这种治疗的患者的步骤。

在另一方面，本发明提供包含第一结构域和第二结构域的融合蛋白，其中第一结构域是结合OX40配体的多肽，而第二结构域是具有抑制功能的多肽。

本发明也提供通过向患者施用有效量的编码本发明融合蛋白的基因序列，治疗或改善患者中自身免疫性疾病、同种免疫性疾病或癌症的方法。