[发明专利]鉴定虫草的环介导等温扩增方法和试剂盒

权利要求书

1.一种鉴定虫草的环介导等温扩增方法，包括，

提取欲鉴定虫草样品的DNA，作为DNA模板，

提供用于环介导等温扩增中的引物，其中所述引物是针对冬虫夏草（Cordyceps sinensis）的特异序列而设计的，

将所述引物与DNA模板与接触，在链置换DNA聚合酶的存在下，恒温扩增，

确定所述扩增产物或副产物的存在，例如通过肉眼或荧光或紫外光照射观察所述产物或副产物，所述副产物例如是焦磷酸镁沉淀;或通过核酸染料溴化乙錠、SYBR Green、EvaGreen、GelRed等在自然光线下和(或)紫外光线下所观察所述扩增产物,其中如果存在所述产物或副产物，所鉴定的虫草样品即为冬虫夏草。

2.权利要求1所述的方法，其中如果所述产物或副产物为阴性，所述方法则进一步包括将所述DNA模板与针对假冬虫夏草的特异序列的引物接触，从而鉴定所述虫草样品为假冬虫夏草，所述假冬虫夏草例如，古尼虫草（Cordyceps gunnii）或蛹虫草（Cordyceps militaris）。

3.权利要求1所述的方法，其中所述冬虫夏草的特异序列为SEQ ID NO:10。

4.权利要求1所述的方法，其中针对冬虫夏草的特异序列的引物为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。

5.权利要求2所述的方法，其中古尼虫草的特异序列为SEQ ID NO:11；蛹虫草的特异序列为SEQ ID NO:12。

6.权利要求2所述的方法，其中针对古尼虫草的特异序列的引物为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:8；可选择地，针对蛹虫草的特异序列的引物为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:7和SEQ ID NO:9。

7.权利要求1-6任一项所述的方法，所述恒温为60-70℃，例如60、61、62、63、64、65、66、67、68、69和70℃，或例如65、66、67、68℃。

8.权利要求1-7任一项所述的方法，所述恒温扩增进行至少10分钟，或至少20分钟、或至少30分钟、或至少40分钟、或至少50分钟，例如进行10-50分钟，进行10-40分钟、10-30分钟、10-20分钟，或者例如10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70或80分钟。

9.权利要求7所述的方法，其中所述引物为针对冬虫夏草的特异序列的引物时，所述引物与DNA模板与接触恒温扩增的温度为65℃；或者

所述引物为针对古尼虫草的特异序列的引物时，所述引物与DNA模板与接触恒温扩增的温度为68℃；或者

所述引物为针对蛹虫草的特异序列的引物时，所述引物与DNA模板与接触恒温扩增的温度为68℃。

10.权利要求1-9任一项所述的方法，还包含对所提取的DNA样品进行质量控制的步骤，所述步骤包括将DNA样品与虫草通用内部控制引物接触，并在链置换DNA聚合酶的存在下，恒温扩增。

11.权利要求1-10所述的方法，其中所述虫草通用内部控制引物为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4。

12.一种利用环介导等温扩增方法鉴定虫草的试剂盒，包含

用于环介导等温扩增中的引物，其中所述引物是针对冬虫夏草的特异序列而设计的。

13.权利要求12所述的试剂盒，还包括针对假冬虫夏草的特异序列的引物，所述假冬虫夏草例如，古尼虫草（Cordyceps gunnii）或蛹虫草（Cordyceps militaris）。

14.权利要求12所述的试剂盒，其中所述冬虫夏草的特异序列为SEQ ID NO:10。

15.权利要求12所述的试剂盒，其中针对冬虫夏草特异序列的引物为SEQ ID NO:1,SEQ ID NO:2，SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6。