[发明专利]短蛸丝氨酸蛋白酶抑制剂OoSerpin基因及其重组蛋白和应用

权利要求书

1.一种短蛸丝氨酸蛋白酶抑制剂OoSerpin基因，其核苷酸序列具有SEQ ID NO.1所示序列。

2.权利要求1所述短蛸丝氨酸蛋白酶抑制剂OoSerpin基因的编码蛋白，其氨基酸序列具有SEQ ID No. 2所示序列。

3.利用权利要求1所述的一种短蛸丝氨酸蛋白酶抑制剂OoSerpin基因生产重组蛋白的方法：其特征在于，利用PCR技术，以rOoSerpin-F: GGATCCAGCAAGATGAAATCATCCAACC和rOoSerpin-R: CTCGAGTCAATCTGCTGGGTTAGTTACCTTG为重组引物，以SEQ ID No.1所示序列为模板进行扩增，所得PCR产物用胶回收试剂盒回收和纯化，克隆入pEASY-E1表达载体，再转化到Trans1-T1 phage resistant 感受态细胞中，培养后，挑取菌落，以T7 Promoter-F:TAATACGACTCACTATAGGG 和rOoSerpin-R: CTCGAGTCAATCTGCTGGGTTAGTTACCTTG分别为正向和反向引物筛选，对阳性克隆进行测序，测序正确的克隆提取质粒后，转化到大肠杆菌 Transetta(DE3) 感受态细胞中，诱导培养后，利用His-tag融合蛋白纯化试剂盒纯化，得到的纯化蛋白经pH为8.0的含2mM的还原型谷胱甘肽、0.2mM的氧化型谷胱甘肽、1mM EDTA、50mM Tris-HCl、50mM NaCl、10%甘油、1%甘氨酸的尿素-TBS甘油缓冲液透析复性，最终获得所述重组蛋白。

4.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生产重组蛋白的方法在制备胰蛋白酶抑制剂药物中的应用。

5.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生产重组蛋白的方法在制备糜蛋白酶抑制剂药物中的应用。

6.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生产重组蛋白的方法制得的产品作为抑菌剂在食品添加剂中的应用。

7.权利要求1所述的基因或权利要求2所述的蛋白或权利要求3所述的生产重组蛋白的方法制得的产品作为抑菌剂在动物饲料添加剂中的应用。