[发明专利]一种采用高速逆流色谱法分离制备左旋棉酚的方法

权利要求书

1.一种用高速逆流色谱来分离制备左旋棉酚的方法，其特征在于：具体包括如下步骤：

(1)消旋体棉酚复合物粗品的制备，其中，所述棉酚复合物是指醋酸棉酚或甲酸棉酚；

(2)高速逆流色谱固定相和流动相的制备；

(3)左旋棉酚复合物的分离纯化步骤；

(4)左旋棉酚的制备。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中消旋体棉酚复合物粗品的提取的具体操作如下：首先将棉籽粕烘干至恒重，加入研磨机中研碎，过80目筛，得到研磨粉末；将研磨粉末搅拌溶解在一定体积的膨胀溶剂中，加压至3-8MPa形成膨胀溶剂体系，搅拌浸提，将压力降低至常压，滤除不溶物；将不溶物置于两倍于膨胀溶剂体积的丙酮中，在超声波-微波协同提取仪中进行二次提取，提取结束后，合并两次提取液，并浓缩至总体积的1/3，然后加入酸的水溶液适量，继续搅拌，析出固体，离心分离得到消旋体棉酚复合物；

其中，所述的膨胀溶剂的体积组成为10-20%丙酮和90-80%CO₂，膨胀溶剂的体积与研磨粉末质量的用量比例为1.2-2.5ml/g；搅拌时温度为0-80℃；超声波-微波协同提取的参数设置为：超声波40-60w，微波120-250w，提取时间30-90min；所述酸的水溶液为质量分数10-90%的水溶液，其中的酸为甲酸或乙酸；加入酸的水溶液的质量与研磨粉末的质量比为1-10:1。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述膨胀溶剂的体积与研磨粉末质量的用量比例优选为1.5-1.8ml/g；搅拌时温度优选为20-30℃；搅拌时间优选为1-4h；所述酸的水溶液为质量分数优选为20-50%的水溶液，其中的酸优选为乙酸；加入酸的水溶液的质量与研磨粉末的质量比优选为2-8：1。

4.根据权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(2)中固定相和流动相的制备的具体操作如下：将正丁醇、乙酸乙酯和水混合，震荡摇匀，静置分层，上层作为固定相，下层作为流动相，两相均进行超声脱气处理20-40min，所述正丁醇、乙酸乙酯和水的体积比为1-1.6:3-5:1。

5.根据权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中左旋棉酚复合物的分离纯化步骤的具体操作过程如下：首先将固定相泵入高速逆流色谱的色谱柱中，使其充满整个色谱柱，然后开启高速逆流色谱，调整主机转速，以一定的流速将流动相泵入色谱柱中，待两相达到动态平衡后，取150mg消旋体棉酚复合物粗品溶解在4-7mL固定相和4-7mL流动相溶剂的混合物即混合溶剂中，得到样品溶液，将样品溶液通过进样阀进样，进样完毕后继续泵入流动相，根据反相HPLC确定左旋棉酚复合物的出峰位置，收集其所在的分离物，脱溶得到左旋棉酚复合物；

其中，所述主机的转速为500-1000rpm；所述流动相流速为1-5mL/min。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述主机的转速优选为650-850rpm；所述流动相流速优选为1-3mL/min。

7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：反相HPLC的条件为：色谱柱为150mm×4.6mm，5μm的Chiralcel OD-RH柱，柱温为30℃，流动相是体积比为30:70的pH3.5磷酸三乙胺缓冲溶液:乙腈;流速为1.0mL/min;紫外检测波长为225nm；进样量为10μl。

8.根据权利要求1-7任一项所述的方法，其特征在于：所述步骤(4)中左旋棉酚的制备的具体操作过程如下：将步骤(3)中得到的左旋棉酚复合物溶解在乙醚中，再加入质量分数0.1%的NaHSO₃溶液，搅拌反应分相，将乙醚相水洗两次，用无水硫酸钠干燥并过滤，减压蒸馏出去乙醚后，再次用乙醚萃取，水洗后脱除乙醚，最后用石油醚重结晶得到左旋棉酚。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述乙醚、NaHSO₃溶液与左旋棉酚复合物的体积质量比12ml:24-36ml:1g。