[发明专利]一种采用高速逆流色谱法分离制备左旋棉酚的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种分离左旋棉酚的方法，更具体地涉及一种采用高速逆流色谱法分离制备左旋棉酚的方法，属于天然产物提取分离领域。

背景技术

棉酚是锦葵科植物草棉、树棉或陆地棉成熟种子、根皮中提取的一种多元酚类物质，具有抑制精子发生和精子活动的作用，其在棉籽粕中的含量最多仅为1.8%左右。近年来，越来越多的研究显示棉酚对多种细胞都具有杀伤和促进凋亡的效果，是一种具有抗肿瘤活性的天然产物。尽管不存在手性原子，棉酚的联萘结构中连接双萘环的化学键具有空间位阻效应，所以天然棉酚是左旋(-)-棉酚和右旋(+)-棉酚的混合物。研究表明，左旋棉酚对细胞的敏感性是右旋棉酚的五倍左右，体外实验表明，左旋棉酚对淋巴、粒细胞、肾上腺、乳腺、宫颈、直肠和中枢神经系统的多种肿瘤细胞株均有明显的增殖抑制活性，左旋棉酚作为抗肿瘤药物已经进入临床二期的实验，它的制备一直是研究的热点问题。

上世纪八十年代就有关于用HPLC法拆分消旋棉酚的报道，通过将消旋棉酚与光学活性氨基醇类化合物缩合形成席夫碱，通过C18反相柱分离后，酸水解得到纯的左旋棉酚。但是氨基醇类化合物价格昂贵，条件不易掌握。

CN1033795A的专利申请报道了一种分离光活性棉酚的方法，其技术方案为：将消旋棉酚与筛选的光学活性伯胺类化合物反应，通过石油醚进行TLC分析，再通过柱层析分离缩合物的非对映异构体，进而水解得到光活性棉酚。但是这种方法需要用到大量的有机溶剂，分离效率低，制备周期长；同时，左旋棉酚中的大量酚羟基与层析柱的填料具有较强的结合作用，产品吸附严重，收率较低。

CN101020626A的专利申请报道了一种制备左旋棉酚的方法，其包括如下操作：通过消旋棉酚与天然氨基酸或氨基酸酯进行缩合，进而重结晶得到缩合物的对映体，最后再水解得到左旋棉酚的方法，但是该方法步骤繁多，重结晶时间长且左旋棉酚的光学纯度较低。

高速逆流色谱(High Speed Counter current chromatography)是一种液-液色谱分离技术，其固定相和流动相均为液体，与传统分离纯化方法相比，具有样品无损失、无污染、高效、快速等诸多优点，是一种新兴的适用于天然活性物质的独特分离技术。但现有技术中并没有采用该技术来分离制备棉酚的报道，尤其是具有优异活性的左旋棉酚。

针对现有技术中存在的缺陷和高效逆流色谱的优势，本发明旨在开发一种快速制备左旋棉酚的方法，以克服现有技术中的缺陷，提高分离收率、降低分离成本，满足广大医药客户的需求。

发明内容

有鉴于此，为了克服现有分离技术的不足，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量的创造性劳动和经过深入研究探索后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明涉及一种用高速逆流色谱来分离制备左旋棉酚的方法，

所述方法具体包括如下步骤：

(1)消旋体棉酚复合物粗品的制备，其中，所述棉酚复合物是指醋酸棉酚或甲酸棉酚；

(2)高速逆流色谱固定相和流动相的制备；

(3)左旋棉酚复合物的分离纯化步骤；

(4)左旋棉酚的制备。

在本发明所述方法中，所述步骤(1)中消旋体棉酚复合物粗品的提取的具体操作如下：首先将棉籽粕烘干至恒重，加入研磨机中研碎，过80目筛，得到研磨粉末；将研磨粉末搅拌溶解在一定体积的膨胀溶剂中，加压至3-8MPa形成膨胀溶剂体系，搅拌浸提，将压力降低至常压，滤除不溶物；将不溶物置于两倍于膨胀溶剂体积的丙酮中，在超声波-微波协同提取仪中进行二次提取，提取结束后，合并两次提取液，并浓缩至总体积的1/3，然后加入酸的水溶液适量，继续搅拌，析出固体，离心分离得到消旋体棉酚复合物，折算棉酚提取率；

其中，所述的膨胀溶剂的体积组成为10-20%丙酮和80-90%CO₂，膨胀溶剂的体积与研磨粉末质量的用量比例为1.2-2.5ml/g，优选1.5-2ml/g，更优选1.5-1.8ml/g；

研磨粉末搅拌溶解在膨胀溶剂中时的搅拌温度为0-80℃，优选10-60℃，更优选20-30℃；该搅拌溶解的搅拌时间为1-5h，优选1-4h，更优选2-3h；因为出现了两个搅拌。

超声波-微波协同提取的参数设置为：超声波40-60w，微波120-250w，提取时间30-90min；

所述酸的水溶液中酸的质量分数为10-90%，优选为20-50%，更优选为30%，其中的酸为甲酸或乙酸，优选乙酸；