[发明专利]一种通过伴生菌数量的适应调节来制备2-酮基-L-古龙酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及Vc二步发酵领域中的一种通过伴生菌数量的适应调节来制备2-酮基-L-古龙酸的方法。

背景技术

Vc二步发酵是二种菌的混合发酵，一种是产酸菌，一种是伴生菌。混合发酵时伴生菌先行生长、代谢释出具生物活性的蛋白，随之作用于产酸菌，启动其生长、产酸。即产酸菌的生长和产酸力很大程度上受伴生菌及其所释蛋白的制约。

伴生菌蛋白释放和作用有其特定的规律：以现行混菌发酵工艺（宋祺,何建明,任双喜,叶晴,郭新友,陈策实,尹光琳，新组合菌系SCB329-SCB933利用L-山梨糖发酵产生维生素C前体2-酮基-L-古龙酸的研究Ⅲ.发酵过程的特征和条件控制，工业微生物;1997年03期），发酵4－6小时伴生菌进入生长对数期，开始释放活性蛋白；12－24小时处稳定期，释放量最大；后转入衰亡期，细胞从营养体转为芽孢，蛋白释放骤减。试验查证蛋白活性约维持10小时，即伴生菌在发酵中促进产酸菌产酸的最佳时段为5－35小时,范围有些偏窄，亟待作一扩展。因此，如何进一步对伴生菌在发酵中促进产酸菌产酸的最佳时段范围进行扩展，从而进一步提高发酵转化率，缩短发酵周期是目前亟待解决的新课题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种通过伴生菌数量的适应调节来制备2-酮基-L-古龙酸的方法，该方法具有发酵周期短、发酵转化率高的特点。

本发明的目的是这样实现的：一种通过伴生菌数量的适应调节来制备2-酮基-L-古龙酸的方法，所述方法是，调整种子培养基山梨糖浓度至4-7%质量体积比,发酵20-30小时，待产酸菌浓度达1×10⁹cfu/ml-3×10⁹cfu/ml,伴生菌营养体浓度回落至1×10⁶cfu/ml-1×10⁷cfu/ml时，终止发酵，按5-15%体积比的接种量将其接入到新增补有0.05%－0.10%质量体积比葡萄糖和0.01%－0.05%质量体积比酵母膏的发酵培养基进行发酵；所述种子培养基山梨糖浓度为4%-5%质量体积比；所述种子培养基的发酵时间为24-26小时；所述待产酸菌浓度达3×10⁹cfu/ml，伴生菌营养体浓度回落至1×10⁷cfu/ml时，终止发酵；所述新增补的葡萄糖的含量为0.05%质量体积比，酵母膏的含量为0.02%质量体积比；所述的接种量为10%体积比。

本发明的要点在于它的制备方法。其生物学机理是：新种液产酸菌的浓度是原种液的3－5倍，内储有充足的伴生菌活性蛋白，致产酸菌达高峰产酸期提前3个小时。发酵24小时后，伴生菌生长转入衰亡期，很少再释放新蛋白。但由于培养基中补有葡萄糖、酵母膏等适宜伴生菌生长的营养，种液内原形成的芽孢会从接入发酵一刻起开始发芽、后生长至大量释放蛋白，届时可补充所需，使产酸菌产酸最佳时段延后约10小时。提升发酵水平，缩短发酵周期20－30%，提高发酵转化2－3个百分点。本发明依伴生菌生长、蛋白释放及活性变化的特性，通过调整现行接种和发酵方式，使其生长和代谢维持一相对平稳水准，延长活性蛋白供应时段，实现发酵的高效运转。

一种通过伴生菌数量的适应调节来制备2-酮基-L-古龙酸的方法与现有技术相比，具有发酵周期短、提升发酵水平，缩短发酵周期、提高发酵转化、使其生长和代谢维持一相对平稳水准，延长活性蛋白供应时段，实现发酵的高效运转等优点，将广泛地应用于Vc二步发酵领域中。

下面结合实施例对本发明进行详细说明。

具体实施方式

以下实施例将有助于对本发明的了解，但这些实施例仅为了对本发明加以说明，本发明并不限于这些内容。

实施例一

在含有5%质量体积比山梨糖的种子培养基中，接入组合菌2980#（伴生菌为巨大芽孢杆菌，产酸菌为普通生酮基古龙酸菌，二菌比例为1:8），29℃振荡培养24小时，产酸菌浓度达1.6×10⁹cfu/ml，伴生菌营养体浓度回落至9.0×10⁶cfu/ml,取3ml接入20ml含山梨糖8%质量体积比的发酵培养基中，内补有0.05%质量体积比葡萄糖和0.02%质量体积比酵母膏。29℃振荡培养36小时，发酵完成，缩短发酵周期20%，提高发酵转化率2.1%。

实施例二