[发明专利]一种启动子OsP006、制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因工程技术领域，特别涉及一种启动子OsP006，含有该启动子的核酸构建体、载体、重组细胞、植物愈伤组织，该启动子的制备方法以及利用该启动子来调控植物中基因表达的方法。

背景技术

启动子是指基因中一段可与RNA聚合酶及其它一些影响转录的反式因子结合实现精确有效起始转录的DNA序列。植物基因表达（转录）的起始时间和表达的程度受启动子的控制，启动子的克隆及功能分析是植物基因表达调控研究的重要内容，也是植物基因工程研究的一个重要方面。

根据启动子的转录模式可将其分为3类：组成型启动子、组织或器官特异性启动子和诱导型启动子。所谓组成型启动子是指在组成型启动子调控下，不同组织器官和发育阶段的基因表达没有明显差异，因而称之组成型启动子。双子叶植物中最常使用的组成型启动子是花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。双子叶植物中的一些强效启动子如CsVMV(Cassava VeinMosaic Virus)启动子、番茄E8启动子、白藜芦醇合酶基因Vst1启动子等高效启动子，在单子叶植物中也有很强的基因调控作用。人们高度重视从植物本身克隆组成型启动子。例如肌动蛋白(actin)和泛素(ubiquitin)等基因的启动子已被克隆。用这些启动子代替CaMV35S启动子，可以更有效地在单子叶植物中驱动外源基因的转录。Naomi等分别从拟南芥的色氨酸合酶β亚基基因和植物光敏色素基因中克隆了相应启动子，用其代替CaMV35S启动子，在转基因烟草中也取得了很好的表达效果(Plant biotechnology，2002，19(1)：19-26)。

单子叶植物基因中常见的启动子有：Ubi启动子(Plant ubiquitin promoter)、Actin启动子(Plant Actin promoter)和Adh-1启动子(Maize alcohol dehydrogenase1promoter)。

Ubi启动子以其启动效率高、甲基化程度低、遗传性状稳定等因素而倍受青睐。目前，已经从很多泛素基因中分离得到启动子序列，包括玉米基因组中的Ubi-1启动子、水稻泛素RUBQ2启动子、拟南芥泛素启动子、向日葵泛素UbB1启动子、烟草泛素Ubi.U4启动子、马铃薯泛素Ubi7启动子、番茄泛素Ubi1-1启动子，大麦泛素Mub1启动子。玉米泛素Ubi-1启动子已经广泛地应用于玉米、小麦、水稻等单子叶植物中，水稻泛素RUBQ2启动子在水稻和甘蔗中也有较多的应用。

Actin启动子1990年由康奈尔大学的McElroy等首次在水稻中发现，属于强组成型启动子。Actin启动子在单子叶禾本科中作用显著，但是邻近科属的植物中的基因调控功能却十分不理想。因此，许多相关研究通过其他单子叶植物寻找Actin启动子，并成功在香蕉、甜瓜、玉米和拟南芥中陆续发现。Actin启动子由于对基因表达的强调控作用，在单子叶植物优良性状的转基因中已经得到越来越广泛的应用。

Adh-1启动子调控ADH(alcohol dehydrogenase)基因，对植物在缺氧环境下乙醇脱氢酶的表达至关重要。Adh-1启动子对单子叶植物特别是谷类植物如水稻、燕麦和大麦，和少部分双子叶植物如烟草，基因的调控功能比CaMV(花椰菜花叶病毒CaMV)35S启动子提高10-50倍。Adh-1启动子主要应用于单子叶植物，对绝大部分双子叶植物基因表达的调控效果都很有限。

本发明人通过对水稻基因组的深入研究，提供一种新的单子叶植物启动子，该启动子能够用于调控单子叶植物中目的基因的表达，同时为研究单子叶植物中目的基因表达提供一种新的工具和选择。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的启动子，能够在植物中调控基因的表达。

本发明的另一目的在于提供含有上述启动子的核酸构建体、载体、重组细胞、植物愈伤组织、植物外植体及植物。

本发明的再一目的在于提供一种制备上述启动子的引物、制备方法，以及一种利用该启动子来调控植物中基因表达的方法。

本发明的再一目的在于提供一种制备转基因植物的方法，以及上述启动子在调控植物中目的基因表达或植物育种中的用途。

为实现上述目的，本发明采用了以下技术方案：

本发明公开了一种启动子，所述启动子含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷酸序列：

a、Seq ID No.1所示的核苷酸序列；

b、与Seq ID No.1互补的核苷酸序列；