[发明专利]一种干酪乳杆菌菌影及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种干酪乳杆菌菌影的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将干酪乳杆菌噬菌体穿孔素基因克隆到干酪乳杆菌表达载体中，得到用于转化干酪乳杆菌的重组表达载体；

（2）将步骤（1）得到的重组表达载体转化干酪乳杆菌，得到重组干酪乳杆菌；

（3）对步骤（2）得到的重组干酪乳杆菌进行培养，诱导噬菌体穿孔素蛋白的表达，获得所述的干酪乳杆菌菌影。

2.按照权利要求1所述的方法，其特征在于所述的干酪乳杆菌表达载体为乳酸菌表达载体pPG612.1。

3.按照权利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的干酪乳杆菌为干酪乳杆菌L.casei 393。

4.按照权利要求1-3任一项所述的方法，其特征在于所述的噬菌体穿孔素基因的序列如SEQ ID NO.1所示。

5.按照权利要求1-4任一项所述的方法，其特征在于步骤（3）中所述的培养是挑取重组干酪乳杆菌pPG612-hocb/L.casei393接种于含有10μg/mL氯霉素的5mL MRS液体培养基中，37℃静置、厌氧培养12-24小时，取培养菌液按体积比1：10-20比例接种于含有10μg/mL氯霉素的MRS扩大培养基中，培养5-10小时，取出一定体积的菌液，离心收集菌体沉淀，将收集的菌体沉淀接种于相同体积的含有10μg/mL氯霉素的含2％（w/w）木糖，且不含葡萄糖的MRS液体培养基中，37℃诱导裂解基因表达，使细菌打孔，诱导时间为40-90h。

6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于步骤（3）中所述的培养是挑取重组干酪乳杆菌pPG612-hocb/L.casei393接种于含有10μg/mL氯霉素的5mL MRS液体培养基中，37℃静置、厌氧培养12小时，取培养菌液按体积比1：20比例接种于含有10μg/mL氯霉素的MRS扩大培养基中，培养7-8小时，取出50ml的菌液，离心收集菌体沉淀，将收集的菌体沉淀接种于50ml的含有10μg/mL氯霉素的含2％（w/w）木糖，且不含葡萄糖的MRS液体培养基中，37℃诱导裂解基因表达，使细菌打孔，诱导时间为88小时。

7.按照权利要求1-6任一项所述的制备方法制备得到的干酪乳杆菌菌影。

8.权利要求7所述的干酪乳杆菌菌影在制备用于转载生物大分子的载体中的应用，所述的生物大分子包括核酸、蛋白质。