[发明专利]一种检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法及使用其的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测食品中卡那霉素的的样本前处理方法及使用其的检测方法，尤其适用于检测牛奶中的卡那霉素。

背景技术

卡那霉素在农业、畜牧业和水产业中应用比较广泛，也常被添加到饲料中促进动物生长发育，但残留在畜产品中的抗生素被人类长期食用后将对人类健康产生巨大危害。因此，欧盟、美国FDA以及日本等许多国家和机构对该类抗生素在食品中的残留限量都作了明确的规定。我国也加强了该类抗生素在牛奶以及其它动物源性食品中的残留监控。

目前，卡那霉素的检测方法很多，如微生物法、酶联免疫法、气相色谱法、高效液相色谱法以及液相色谱-质谱联用法。检测牛奶中卡那霉素时，通常样品前处理比较复杂，且最终回收率往往不尽人意。在《GB/T 22969-2008奶粉和牛奶中链霉素、双氢链霉素和卡那霉素残留量的测定之液相色谱-串联质谱法》中，样品经磷酸溶液提取并除去蛋白后，上清液需分别通过苯磺酸型固相萃取柱和羧酸型固相萃取柱的净化程序，检测过程耗时较长、操作步骤繁琐，不能满足日常快速检测的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，其简单快速，且可有效保留样本中的卡那霉素。

本发明的另一个目的是提供一种检测牛奶中卡那霉素的方法，其操作简单快速，且回收率和精密度较高。

本发明提供了一种检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法，包括：取待测牛奶样品，加入磷酸水溶液振荡提取8至10分钟，再加入三氯乙酸水溶液，混合30秒后离心，取离心后的上清液经滤纸过滤，得到滤液；将滤液用混合型阳离子交换固相萃取柱净化，得到净化液；以及将净化液在40℃水浴中氮气吹干，再加入定溶液，涡旋溶解后经0.22μm水系滤膜过滤，得到待测液；定溶液的配制方法为：取4毫升甲酸，用0.01摩尔/升的庚烷磺酸钠水溶液定容至100毫升。

在检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，磷酸水溶液中磷酸的体积分数为5%，处理每克待测牛奶样品需要磷酸水溶液的量为3.75毫升。

在检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的浓度为1克/毫升，处理每克待测牛奶样品需要三氯乙酸水溶液的量为0.375毫升。

在检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，离心的转速为4000至5000转/分钟，离心时长为8至10分钟。

在检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，净化的步骤为：将滤液加入已活化的混合型阳离子交换固相萃取柱，控制流速不高于2毫升/分钟，待滤液全部通过后，依次用3毫升体积分数为2%的甲酸水溶液和3毫升甲醇洗涤混合型阳离子交换固相萃取柱，弃去全部流出液，最后用3毫升体积分数为5%的氨化甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，得到净化液。

在检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法的一种示意性实施方式中，混合型阳离子交换固相萃取柱活化的方法为：先用3至5毫升甲醇过柱，再用3至5毫升水过柱。

本发明还提供了一种检测牛奶中卡那霉素的方法，包括：用上述的检测牛奶中卡那霉素的样本前处理方法对待测牛奶样品进行前处理，得到待测液；以及用液相色谱-串联质谱法对待测液中卡那霉素的含量进行检测。

在检测牛奶中卡那霉素的方法的一种示意性实施方式中，液相色谱-串联质谱法的色谱条件为：色谱柱：ACQUITY UPLC HSS T3柱（Φ2.1×100毫米，1.8微米）；柱温：40℃；进样体积：10微升；洗脱液体：流动相A为乙腈，流动相B为体积分数为0.1%的甲酸水溶液；梯度洗脱：0 分钟，10%流动相A，其余部分为流动相B；0至1.5 分钟，10%至25%流动相A，其余部分为流动相B；1.5至2.5 分钟，25%至100%流动相A，其余部分为流动相B；2.5至3.0 分钟，100%流动相A，其余部分为流动相B；3.0至3.5 分钟，100%至10%流动相A，其余部分为流动相B；3.5至4.5 分钟，10%流动相A，其余部分为流动相B；和流速：0.3毫升/分钟。

在检测牛奶中卡那霉素的方法的一种示意性实施方式中，液相色谱-串联质谱法的质谱条件为：离子化模式：电喷雾正离子模式；质谱扫描方式：多反应监测；电离电压：3.00 千伏；离子源温度：120℃；去溶剂气温度：400℃；去溶剂气：氮气；流量：600升/小时；和碰撞气：高纯Ar；流量：50升/小时。