[发明专利]一种检测痕量酚类环境雌激素的方法

说明书

技术领域

本发明具体涉及一种检测痕量酚类环境雌激素的方法，属于生物样品和环境检（监）测技术领域。

背景技术

酚类环境雌激素是环境中最常见的一类具有雌激素活性的污染物。大量环境调查结果和实验室研究表明酚类环境雌激素如双酚A、五氯酚和雌二醇等对近年来男性睾丸癌和前列腺癌发病率的上升、精子数量的减少、女性乳腺癌、子宫癌发病率的增加、雄性动物的雌性化和免疫功能的改变等均具有不容忽视的作用。故酚类环境雌激素（PEs）已成为近年来重点研究和监测的热点污染物。目前，美国、日本和欧洲等国家已对水体中部分酚类环境雌激素的最大残留限量作了规定，一般在0.1μg/L甚至更低的水平。然而，目前的研究结果表明：该类污染物在更低的水平下，仍然能够对生物产生雌激素效应。因此，建立该类化合物在生物体内的剂量—响应曲线，并确定其表现雌激素活性的阈值至关重要。为此，必须尽快建立具有极高灵敏度和选择性的定性和定量分析方法。

目前已有的萃取技术绝大多数还是依赖于液液萃取或固相萃取进行分离和富集，操作过程比较繁琐，有机溶剂挥发污染严重，检测费用较高。且现有的微萃取技术所使用的萃取剂和分散剂仍存在一定的毒性和污染问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种检测痕量酚类环境雌激素的方法。

为了实现以上目的，本发明所采用的技术方案是：

一种检测痕量酚类环境雌激素的方法，主要包括提取和检测两个步骤，所述的提取包括以下步骤：调节待测溶液的pH值为2.5～3.5（以利于提高微萃取回收率），加入表面活性剂和萃取剂，超声混匀，再低温离心，弃去上层即可。

所述的酚类环境雌激素为双酚A（BPA）、17α-雌二醇（17α-Estradiol）、4-叔丁基酚（4-BP）、4溴双酚A（4-Br-BPA）和/或4-叔辛基酚（4-t-OP）。

所述的表面活性剂为十二烷基硫酸钠（SDS）、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）或吐温，如吐温20。优选十二烷基硫酸钠。

所述的萃取剂为氯苯（C₆H₅Cl）、四氯甲烷（CCl₄）或三氯甲烷（CHCl₃）。优选三氯甲烷。

所述超声的功率为350～450W，开关间隔为5s:3s（即开5s关3s），共计40～60次。优选50次。

所述低温离心的温度为0～4℃，转速为4000～6000rpm，时间为2～5min。优选的，低温超速离心的温度为4℃，转速为5000rpm，时间为2min。

所述的检测包括如下步骤：将提取得到的溶液用高效液相色谱仪进行定量检测，流动相为乙腈和去离子水，梯度洗脱条件为：0～6min，乙腈:水=45:55；6～20min，乙腈:水=70:30；柱温为25℃，紫外波长为270nm，流速为0.8mL/min，进样量为20μL。

一般的，在提取步骤之前，针对不同的样品其前处理步骤存在差异，比如生物样品、环境样品、食品或药品等。

当检测对象为生物样品（如螺旋藻细胞）中酚类环境雌激素残留时，需要对生物样品进行清洗、破碎和净化处理，具体包括如下步骤：（1）清洗生物样品去除培养基及部分代谢产物，超声破碎；（2）在超声破碎后的样品中加入浓硫酸净化，静置，离心，取上清液备用。即采用浓硫酸磺化法净化螺旋藻破碎细胞中如蛋白质、脂质等大分子物质，超声破碎后样品与浓硫酸的体积比为100:3。该上清液即为待测溶液。

所述步骤（1）中采用离心法清洗生物样品，即将生物样品离心取沉淀（生物样品加水后离心或生物样品本身即为悬浮液），在沉淀中加水再次离心，重复上述步骤，最后弃去上清液即可。

所述步骤（1）中超声破碎之前先在沉淀中加入适量的水，混匀后备用。对于螺旋藻细胞悬浮液，优选的，超声破碎的功率为350～450W，开关间隔为5s:3s，开关间隔次数为30次，共计50～60次。

所述步骤（2）静置的时间为2～5min，优选2min。超速离心的转速为4000～6000rpm，时间为2～5min，优选转速为5000rpm，时间为2min。

当检测对象为环境样品（如水样）中痕量的酚类环境雌激素时，需要对水样进行过滤除杂操作（如过0.22μm的滤膜除杂），滤液即为待测溶液；或者在滤液中加入浓硫酸净化，静置，离心，取上清液备用，该上清液即为待测溶液。