[发明专利]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法

权利要求书

1.一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备：

a.种子活化培养：分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r／min下好氧培养36～48h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为10⁷CFU／mL；

b.一级种子制备：将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为1-5％的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r／min下好氧培养36～48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子；

c.二级种子制备：将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为1～5％的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r／min下好氧培养36～48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子。

S2：黑曲霉种子的制备：

(1)黑曲霉活化培养：从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度30～35℃、湿度75～80％下好氧培养60～72h，可得到黑曲霉斜面孢子；

(2)黑曲霉扩大培养：将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用pH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为1～5％的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度30～35℃、湿度75～80％下好氧培养96～120h，可得到黑曲霉种子。

S3：菌渣培养基制备：

按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基：水分含量为80～85％的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；

水分含量为80～85％的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下：取四环素新鲜菌渣100kg，121℃湿热灭菌20～30min；然后加入质量百分比为1％的有效氯为10％的次氯酸钠溶液，充分搅拌1h；再加入草酸，充分搅拌30min；所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1：1，最后将水分含量调节为80-85％。

S4：酵母浸膏的制备：

将上述步骤S1c中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为1～10％接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，30～35℃，40～80r／min下好氧培养3～5d，然后调节pH为6.0-7.0，在55℃水浴中按质量百分比为0.03％的量加入酵母抽提酶，水解16～24h，升温到80℃使酶失活，待其冷却后，4000r／min，离心10min，滤液经减压浓缩控制其水分为15～20％，即为酵母浸膏。

2.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：

所述种子活化扩大培养基、霉菌活化培养基，霉菌扩大培养基的制备方法分别是：

1)种子活化扩大培养基制备：按下述重量比的原料混合即可得种子活化扩大培养基：蛋白胨20g，酵母浸膏10g，葡萄糖20g，水1000ml；

2)霉菌活化培养基制备：按下述重量比的原料配制即可得霉菌活化培养基：取新鲜去皮土豆200g，切碎至粒度小于5mm×5mm×5mm，加1000ml水煮沸20分钟，过滤后滤液用水稀释至1000ml，然后再加入葡萄糖20g，琼脂20g即可；

3)霉菌扩大培养基制备：按下述重量比的原料配制即可得霉菌扩大培养基：麸皮1000g，水1000ml。

3.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：所述步骤S4中的接种量为5％。

4.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：所述步骤S1b中的接种量为3％。

5.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：所述步骤S1c中的接种量为3％。

6.根据权利要求1所述的一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：所述步骤S2(2)中的接种量为3％。