[发明专利]一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种微生物发酵领域，尤其是涉及一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。

背景技术

酵母浸膏是以酵母为原料，利用现代生物技术通过酵母细胞自溶破壁和酵母自身的酶系对酵母细胞质进行水解或以酶制剂进行水解，再经一系列的抽提、浓缩等工序得到的粉状或膏状或液体的产品，含有丰富的氨基酸、功能性多肽、抗衰老活性因子、膳食纤维和甘露糖，还含有人体不可缺少的核酸、核苷酸和钙，富含B族维生素及磷、镁、锰、锌、硒等多种微量元素。酵母浸膏被广泛应用于生物发酵、生物工程、生物医药等领域，具体地说，可广泛用于发酵法生产抗生素、氨基酸、有机酸、酶制剂、生物防腐剂、生物材料、维生素、透明质酸等的培养基配制以及生物工程、生物医药等领域。我国目前生产酵母浸膏的厂家较少，但市场需求量较大。由于酵母浸膏生产原料主要是以小麦等粮食作物为原料，价格偏高，因而造成酵母浸膏的生产成本还处在一个比较高的水平，难以达到实际且实惠的应用。

四环素菌渣是发酵法生产四环素过程中，发酵醪液进行固液分离时形成的菌饼部分，由于其蛋白质、矿物质等养分含量丰富，是一种良好的可再用资源。目前还没有一种能利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

一种利用降解处理四环素后的菌渣生产酵母浸膏的方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1：酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子的制备：

a.种子活化培养：分别从酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露保存管中挑取一环，分别接入种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r／min下好氧培养36～48h，可分别得到活化的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子；所述种子浓度为10⁷CFU／mL；

b.一级种子制备：将上述步骤a制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露种子按质量百分比为1～5％的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r／min下好氧培养36～48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子；

c.二级种子制备：将上述步骤b制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露一级种子按质量百分比为1～5％的接种量，分别接种于种子活化扩大培养基中，30～35℃，100～140r/min下好氧培养36～48h，可分别得到酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子。

S2：黑曲霉种子的制备：

(1)黑曲霉活化培养：从黑曲霉保存管中挑取一环，在霉菌活化培养基制备的斜面上划上斜线，在温度30～35℃、湿度75～80％下好氧培养60-72h，可得到黑曲霉斜面孢子；

(2)黑曲霉扩大培养：将上述步骤(1)得到的黑曲霉斜面管中的孢子用pH7.0的磷酸盐缓冲溶液洗下，取孢子悬液按质量百分比为1-5％的接种量，接种于霉菌扩大培养基中，在温度30-35℃、湿度75-80％下好氧培养96-120h，可得到黑曲霉种子。

S3：菌渣培养基制备：

按下述重量比的原料混合即可得菌渣培养基：水分含量为80～85％的降解处理四环素后的菌渣100kg，玉米淀粉1.4kg，硫酸铵0.6kg，葡萄糖0.5kg，充分混合；

水分含量为80-85％的降解处理四环素后的菌渣的制备方法如下：取四环素新鲜菌渣100kg，121℃湿热灭菌20-30min；然后加入质量百分比为1％的有效氯为10％的次氯酸钠溶液，充分搅拌1h；再加入草酸，充分搅拌30min；所述次氯酸钠与草酸的摩尔比为1：1，最后将水分含量调节为80-85％。

S4：酵母浸膏的制备：

将上述步骤S1c中制备的酿酒酵母、热带假丝酵母和EM原露二级种子以及步骤S2(2)中制备的黑曲霉种子，分别按质量百分比为1～10％接种量接入上述步骤S3制备的菌渣培养基中，30～35℃，40-80r／min下好氧培养3～5d，然后调节pH为6.0～7.0，在55℃水浴中按质量百分比为0.03％的量加入酵母抽提酶，水解16-24h，升温到80℃使酶失活，待其冷却后，4000r/min，离心10min，滤液经减压浓缩控制其水分为15-20％，即为酵母浸膏。

所述种子活化扩大培养基、霉菌活化培养基，霉菌扩大培养基的制备方法分别是：