[发明专利]基于表位抗原肽的抗mtDNA抗体酶联免疫的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种基于mtDNA为抗原的抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法，包括如下步骤：

1）应用线粒体分离试剂盒（Thermo）抽提哺乳动物培养细胞线粒体；

2）应用DNA抽提试剂盒（Qiagen）提取线粒体DNA（mtDNA）；

3）DNA凝胶电泳检测mtDNA完整性（约16,500bp），NanoDrop^TM1000分光光度仪检测mtD NA浓度（pg/ml）及质量（OD260/280>1.8）；

4）用DNA包被液（Pierce）将mtDNA包被于ELISA板上（Nunc），包被浓度为5μg/ml，100μL每孔，4℃过夜；

5）4℃取出包被板，PBS洗板4次，1%明胶室温封闭1h；

6）清空封闭液，PBS洗板4次，加入1:100稀释的待测血清，室温孵育1-2h；

7）清空待测血清，PBS洗板4次，加入辣根过氧化物酶标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）二抗，室温孵育1h；

8）清空抗人IgG二抗，PBS洗板5次，加入底物，室温避光孵育10-15min；

9）加入终止液，酶标仪波长450nm读取OD值。

2.根据权利要求1所述的基于mtDNA为抗原的抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法的应用，其特征在于，该方法在系统性红斑狼疮中的诊断应用，用于判定系统性红斑狼疮疾病危重度和转归。

3.根据权利要求1所述的基于mtDNA为抗原的抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法，包括免疫印迹、免疫发光和胶体金法。

4.根据权利要求1所述用于抗mtDNA抗体酶联免疫检测方法试剂或试剂盒，其特征在于：以线粒体DNA(mtDNA)作为抗原包被ELISA板制得。