[发明专利]一种高纯度莱鲍迪甙A的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种高纯度莱鲍迪甙A的制备方法，属于食品化学技术领域。

背景技术

甜菊糖是一种天然甜味剂，为二萜糖甙的混合物。其中莱鲍迪甙A（RA）被公认为是蔗糖及其他合成甜味添加剂的最佳替代品。2008年后西方发达国家，特别是美国FDA给予RA（纯度≥97%）GRAS(一般公认安全物质)地位后，全球市场上对高纯度RA的需求迅速放大。

目前，已公开高纯度的RA的制备方法有重结晶法和色谱法。重结晶法是利用甜菊糖各糖苷在有机溶剂如甲醇中溶解度的差异而多次结晶制备出高纯度的RA，该法工序繁琐、收率较低、溶剂消耗大且成本较高。

Dominik Bergs等人（Preparative purification of rebaudioside A from aqueous extracts using chromatography: a process idea, J. Verbr. Lebensm., 2012(7):295–303）采用3步色谱串联制备RA，其最后一步精制过程采用伯胺基（-NH(CH₂)₂NH₂）硅胶基质色谱填料，洗脱剂为80%乙腈水溶液，最终得到纯度为96.8% 的RA，该步收率为97.5%。

美国专利US20120083593 公开了一种RA的精制方法。其核心是采用伯胺基（-NH(CH₂)₂NH₂）树脂，该树脂归属于弱碱性阴离子交换树脂，树脂的骨架是聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸酯，以水溶性有机溶剂如甲醇、异丙醇、丙酮、乙腈的组合或5%-40%的丙酮水溶液洗脱，经结晶得到纯度＞98%的RA组分。

上述两种方法均采用伯胺基填料，但伯胺基填料存在易水解，填料寿命短等缺点，因而最终会导致产品成本的提高。

发明内容

本发明的目的在于提供一种适宜于工业化生产的莱鲍迪甙A的制备方法，以克服伯胺基填料易水解、稳定性差、填料寿命短的不足。

本发明是通过以下技术方案来实现：

一种莱鲍迪甙A的制备方法，其包括以下步骤：

（1） 色谱柱平衡：向色谱柱内通入流动相平衡色谱柱；

（2） 上样：将含有莱鲍迪甙A的粗品溶解于流动相，泵入色谱柱内或通过将莱鲍迪甙A粗品流动相溶液与色谱填料拌合，将干燥后的色谱填料放入色谱柱的柱头，所述色谱填料为磺酸基或苯磺酸基色谱填料；

（3） 洗脱：以紫外或ELSD检测器监测，以流动相洗脱至莱鲍迪甙A从色谱柱出峰结束。

所述磺酸基或苯磺酸基色谱填料的骨架为硅胶、氧化铝或二氧化锆，最好为硅胶，功能基团为磺酸基-SO₃^-R或苯磺酸基-phe-SO₃^- R，R为H⁺、Na⁺、K⁺、Ca²⁺或Mg²⁺。

所述磺酸基或苯磺酸基色谱填料为商品化的Sepra^TM SCX、ZORBAX 300SCX或Intersil CX。

上述制备方法中，流动相为甲醇水溶液、乙醇水溶液、异丙醇水溶液、丙酮水溶液或乙腈水溶液，步骤（1）和（2）中，平衡色谱柱的流动相和上样时的流动相均为体积比85-95%的丙酮水溶液。

步骤（3）中，洗脱时的流动相为等度洗脱或多阶段等度洗脱或线性梯度洗脱。若采用等度洗脱，流动相为体积比85-95%的丙酮水溶液；若采用多阶段等度洗脱，先采用体积比85-95%的丙酮水溶液洗脱至莱鲍迪甙C出峰结束，再切换至低于体积比85%的丙酮水溶液或纯水洗脱；若采用线性梯度洗脱，则上样时的流动相浓度至纯水溶液。

上述色谱柱平衡、上样、洗脱各步骤的流速为50-600cm/hr，最好为200-250cm/hr。

本发明的优点及积极效果：

1、美国专利US20120083593采用高聚物骨架材料，易溶胀而导致柱压不稳定，甚至流动相难以流动，本发明采用刚性无机介质骨架材料，可克服其不足；

2、美国专利US20120083593及Dominik Bergs等人的方案均采用稳定性差、易水解的伯胺基填料，填料寿命短，本发明采用稳定的磺酸基以克服其不足；

3、本发明方法得到的莱鲍迪甙A纯度高，适宜于工业化生产。

具体实施方式