[发明专利]采用特异性引物PCR检测柴胡和狭叶柴胡的方法

权利要求书

1.柴胡（Bupleurum chinense DC.）的PCR检测特异性引物对，特征在于其是：

上游引物F1:5’-ATGCCTCCGC CCCGTTTGG-3’和

下游引物R1:5’-TGCGTTTTCC GATCTCCGGT-3’。

2.狭叶柴胡（Bupleurum scorzonerifolium Willd.）的PCR检测特异性引物对，特征在于其是：

上游引物F2:5’-TGTCGTCGGC CTCGGCCTG-3’和

下游引物R2:5’-ACGACGAGGC ACGGGAGGT-3’。

3.含有权利要求1所述引物对的用于检测柴胡的试剂盒。

4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺和PCR反应缓冲液。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括标准阳性模板。

6.采用权利要求1所述的特异性引物PCR检测柴胡的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）提取样品中的DNA；

2）以步骤1）中提取的DNA为模板，使用权利要求1所述的引物F1和R1，进行PCR扩增反应；

3）用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，确认是否为柴胡。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，PCR扩增反应体系以25μL计为：

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，PCR反应条件为：93℃5min；93℃30s，60℃30s，72℃30s，共35个循环；72℃5minn，10℃10min。

9.权利要求3-5任一项所述的试剂盒在检测柴胡中的应用。

10.含有权利要求2所述引物对的用于检测柴胡的试剂盒。